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(1)Tj
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(Laboratorio de Oncologa Molecular CRIB. Facultad de Medicina, UCLM. Albacete)Tj
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(2)Tj
9 0 0 9 31.6832 101.61 Tm
(Unidad de Biologa Celular. Centro Nacional de Microbiologa. Instituto de Salud Carlos III. Majadahonda \(Madrid\))Tj
5.4 0 0 5.4 26.7332 93.8267 Tm
(3)Tj
9 0 0 9 31.6832 90.8566 Tm
(Unidad de Radioterapia. Complejo Hospitalario Universitario de Albacete)Tj
-0.55 -2.3896 TD
(Recibido: 27.07.05)Tj
0 -1.1948 TD
(Aceptado: 06.09.05)Tj
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(Originales)Tj
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Q
q
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W n
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
[(PKB/Akt media la radio sensibilidad asociada a Ataxia T)91.7(elangiectasia)]TJ
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(J. Guinea Viniegra)Tj
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0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 204.8727 612.291 Tm
-0.0001 Tc
(, N. Martnez)Tj
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0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 264.5109 612.291 Tm
-0.0001 Tc
(, C. I. Aceves Luquero)Tj
6 0 0 6 359.7673 615.5909 Tm
0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 362.7673 612.291 Tm
(, E. Galn Moya)Tj
6 0 0 6 432.4914 615.5909 Tm
(1)Tj
10 0 0 10 435.4915 612.291 Tm
-0.0001 Tc
(, M. A. de la Cruz)Tj
6 0 0 6 511.5803 615.5909 Tm
0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 514.5804 612.291 Tm
(, )Tj
-37.6605 -1.2904 TD
-0.0001 Tw
(J. L. Callejas Valera)Tj
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0 Tw
(1)Tj
10 0 0 10 228.4514 599.387 Tm
-0.0001 Tc
(, A. Arraiga Aragn)Tj
6 0 0 6 314.2619 602.687 Tm
0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 317.2619 599.387 Tm
-0.0001 Tc
(, C. Ramrez-Castillejo)Tj
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0 Tc
(1)Tj
10 0 0 10 417.9866 599.387 Tm
-0.0001 Tc
(, M. V. Villas Snchez)Tj
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0 Tc
(2)Tj
10 0 0 10 514.5804 599.387 Tm
(, )Tj
-13.4006 -1.2904 TD
-0.0001 Tc
(J. M. Rojas)Tj
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0 Tc
(3)Tj
10 0 0 10 432.4495 586.483 Tm
-0.0001 Tc
(, R. Snchez-Prieto)Tj
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0 Tc
(1)Tj
ET
0 0 0 0 k
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f
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-0.0002 Tc
(Resumen)Tj
ET
Q
q
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W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
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11 0 0 11 37.4765 481.6153 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0476 Tw
[(El gen mutado en el sndrome de Ataxia T)69.8(elangiectasia est implicado en mltiples funciones celulares que)]TJ
-0.9767 -1.2727 TD
0.0391 Tw
(abarcan desde la respuesta al dao genotxico causado por la radiacin ionizante hasta la respuesta a insulina.)Tj
T*
0.077 Tw
(Curiosamente la ruta de sealizacin mediada por Akt esta relacionada con los mismos estmulos. En el pre-)Tj
T*
0.0911 Tw
[(sente estudio demostramos como el gen mutado en Ataxia T)69.9(elangiectasia \(A)110.9(TM\) controla la fosforilacin de)]TJ
T*
0.033 Tw
(Akt, en respuesta a estmulos como la radiacin ionizante o la insulina. Estos datos han sido obtenidos usando)Tj
T*
0.0164 Tw
(modelos experimentales como clulas derivadas de enfermos de Ataxia o de ratones nulos para la expresin de)Tj
T*
-0.1111 Tc
0 Tw
(AT)Tj
1.2219 0 TD
0 Tc
0.0373 Tw
[(M. Nuestro estudio propone nuevas explicaciones para entender la radio sensibilidad caracterstica de estos)]TJ
-1.2219 -1.2727 TD
0 Tw
(enfermos y destaca el papel primordial de Akt en la respuesta a la radiacin ionizante.)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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W n
BT
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0.0001 Tw
(Palabras clave:)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
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/F1 1 Tf
11 0 0 11 37.4765 341.6153 Tm
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/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(A)Tj
0.6111 0 TD
(TM. Akt radiosensibilidad.)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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W n
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(Oncologa, 2005; 28 \(7\):329-337)Tj
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Q
q
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[(Intr)17.7(oduccin)]TJ
ET
Q
q
1 i
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11 0 0 11 37.5138 462.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0021 Tc
0.1228 Tw
[(La enfermedad de Ataxia T)69.9(elangiectasia \(A)110.9(T\) es)]TJ
-0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.058 Tw
(un sndrome autosmico recesivo que se caracteriza)Tj
T*
0.0357 Tw
[(por un retraso del crecimiento, ataxia cerebelar)39.8(, sus-)]TJ
T*
0.0133 Tw
[(ceptibilidad al cncer)39.8(, telangiectasia ocular)39.8(, inmuno-)]TJ
T*
0.0165 Tw
(deficiencia grave, resistencia a insulina e hipersensi-)Tj
T*
0.0152 Tc
0.1098 Tw
(blidad a la radiacin gamma entre otros sntomas)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(\(para revisin consultar\))Tj
6.6 0 0 6.6 134.2648 388.6143 Tm
0 Tc
(1)Tj
11 0 0 11 137.5649 384.9843 Tm
(.)Tj
-9.0956 -1.1818 TD
0.115 Tw
[(En el nivel celular)39.8(, el gen mutado en Ataxia T)69.8(e)0(-)]TJ
-0.9767 -1.1818 TD
0.0949 Tw
[(langiectasia \(A)110.9(TM\) participa en un amplio espectro)]TJ
T*
0.0532 Tw
(de procesos biolgicos que incluye control del ciclo)Tj
T*
0.0363 Tc
0.0887 Tw
[(celular)39.8(, estabilidad del genoma, mecanismos de)]TJ
T*
0.0355 Tc
0.0894 Tw
(apoptosis y respuesta a estrs genotxico, entre)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(otros)Tj
6.6 0 0 6.6 48.7651 310.6143 Tm
(2-5)Tj
11 0 0 11 57.5614 306.9843 Tm
0 Tc
0.044 Tw
[(. La protena codificada por el gen A)110.8(TM per-)]TJ
-2.7992 -1.1818 TD
-0.0001 Tc
0.1228 Tw
[(tenece a la superfamilia de las fosfatidil-inositol-3-)]TJ
T*
0.0012 Tc
0.1237 Tw
(quinasas \(PI3K\) al presentar un dominio similar al)Tj
T*
0.0086 Tc
0.1164 Tw
[(de la subunidad cataltica p1)36.9(10, pero hasta el mo-)]TJ
T*
0 Tc
0.0845 Tw
(mento no se ha demostrado su actividad lpido qui-)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(nasa)Tj
6.6 0 0 6.6 46.3132 245.6143 Tm
0 Tc
(6)Tj
11 0 0 11 49.6132 241.9843 Tm
0.0462 Tw
[(. Dicho dominio es responsable de la fosforila-)]TJ
-2.0766 -1.1818 TD
0.0147 Tw
(cin de protenas como p53, ChK1, 4EBP y BRCA1)Tj
T*
0.0019 Tw
[(en el motivo conservado -S/T)91.8(-Q- en el cual S o T ac-)]TJ
T*
0.0204 Tc
0.1045 Tw
(tan como residuos fosfoaceptores \(para revisin)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(consultar\))Tj
6.6 0 0 6.6 70.7463 193.6143 Tm
0 Tc
(7)Tj
11 0 0 11 74.0463 189.9843 Tm
0.0718 Tw
(. Es destacable el hecho de que el propio)Tj
-4.2978 -1.1818 TD
0 Tw
(A)Tj
0.6178 0 TD
0.0067 Tc
0.1183 Tw
(TM se regula por autofosforilacin en el residuo)Tj
-0.6178 -1.1818 TD
0.0088 Tc
0.1161 Tw
[(Serina 1981, con igual motivo \(-S/T)91.7(-Q-\) al de sus)]TJ
T*
0 Tc
0 Tw
(sustrato, como se ha publicado recientemente)Tj
6.6 0 0 6.6 226.5187 154.6143 Tm
(8)Tj
11 0 0 11 229.8188 150.9843 Tm
(.)Tj
-17.4823 -1.1818 TD
-0.015 Tc
0.0129 Tw
(La protena PKB/Akt, referida como Akt en adelan-)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0208 Tw
(te, es un actor clave en una de las rutas de superviven-)Tj
T*
0.0302 Tw
[(cia celular)39.8(, mediante la inhibicin de seales apoptti-)]TJ
T*
-0.0147 Tc
0.1247 Tw
[(cas y su papel en la activacin del ciclo celular)39.6(, con)]TJ
T*
-0.015 Tc
0 Tw
(una implicacin clara en cncer y otras patologas)Tj
6.6 0 0 6.6 238.1045 89.6143 Tm
(9, 10)Tj
11 0 0 11 250.8097 85.9843 Tm
0 Tc
(.)Tj
-19.3905 -1.1818 TD
0.0102 Tw
(Por otra parte, se ha demostrado que Akt se activa)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0227 Tc
0.1022 Tw
(potentemente en respuesta a diversos factores de)Tj
23.4616 39 TD
0 Tc
0.1125 Tw
(crecimiento como insulina o IGF-1, y asimismo en)Tj
0 -1.1818 TD
-0.0001 Tc
0.0691 Tw
(respuesta a dao en el ADN)Tj
6.6 0 0 6.6 411.7264 479.6143 Tm
0 Tc
0 Tw
(1)Tj
0.4386 0 TD
0.0691 Tw
(1, 12)Tj
11 0 0 11 428.277 475.9843 Tm
(. Parece que para la)Tj
-13.039 -1.1818 TD
0.0457 Tw
(completa activacin es crtica la fosforilacin en los)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.0292 Tw
[(residuos Thr 308, mediada por PDK1, y Ser473 me-)]TJ
T*
0 Tc
0.038 Tw
(diada por una protena an no caracterizada llamada)Tj
T*
-0.0002 Tc
0 Tw
(PDK2\))Tj
6.6 0 0 6.6 316.0056 427.6143 Tm
0 Tc
(13)Tj
11 0 0 11 322.6057 423.9843 Tm
(.)Tj
-2.4559 -1.1818 TD
0.0938 Tw
(Curiosamente, estas dos rutas de transduccin de)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0038 Tc
0.1212 Tw
(seales en apariencia independientes, parecen con-)Tj
T*
0.0085 Tc
0.1165 Tw
[(ver)17.8(ger en el plano fisiolgico cuando responden a)]TJ
T*
0 Tc
0.0412 Tw
(estmulos como insulina o radiacin gamma. De he-)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.0813 Tw
(cho, modelos animales Knock Out \(KO\) para Akt)Tj
T*
0 Tc
0.0573 Tw
[(y A)110.9(T)0(M muestran similitud en anormalidades fenot-)]TJ
T*
0.0073 Tc
0.1177 Tw
(picas como retraso del crecimiento, defectos en la)Tj
T*
0 Tc
0.0414 Tw
(maduracin del sistema inmunitario, infertilidad, re-)Tj
T*
0 Tw
(sistencia a insulina o radiosensibilidad)Tj
6.6 0 0 6.6 454.075 310.6143 Tm
(14, 16)Tj
11 0 0 11 470.5752 306.9843 Tm
(.)Tj
-15.9076 -1.1818 TD
0.0672 Tw
(En el presente trabajo se explora la posible cone-)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0849 Tw
(xin entre estas dos vas de accin dependientes de)Tj
T*
0.0485 Tw
[(Akt y A)110.9(TM, y si esta relacin permite avanzar en el)]TJ
T*
0.0168 Tc
0.1082 Tw
(entendimiento de propiedades biolgicas como la)Tj
T*
0 Tc
0.0067 Tw
(radiosensibilidad y la resistencia a insulina, observa-)Tj
T*
0 Tw
[(das en la enfermedad de la Ataxia T)69.8(elangiectasia.)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
14 0 0 14 284.8479 189.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
(Materiales y mtodos)Tj
11 0 0 11 284.8479 163.9843 Tm
0.0001 Tw
[(Lneas celular)17.7(es)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 295.5912 137.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0.0286 Tw
[(Las lneas GM00637, GM09607 y GM08391 fue-)]TJ
-0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.0293 Tw
(ron cedidas por el Instituto Coriell para la investiga-)Tj
T*
0.0297 Tw
(cin Biomdica \(Candem, NJ\). MEF procedentes de)Tj
T*
0.0182 Tc
0.1067 Tw
[(animales Knock Out para p53 \(p53 -/-,A)110.9(TM +/+\))]TJ
T*
0.0133 Tc
0.1117 Tw
[(llamados KO p53, y tambin el doble Knock Out)]TJ
T*
-0.0001 Tc
0.0883 Tw
[(para p53 y A)110.7(TM \(p53 -/-,A)110.8(TM -/-\) denomindos co-)]TJ
T*
0.097 Tw
[(mo DKO fueron generosamente donados por el Dr)54.8(.)]TJ
ET
0 0 0 1 K
0 J 0 j 0.5 w 10 M []0 d
26.77 719.95 m
517.12 719.95 l
S
0 0 0 0 k
26.77 788 490.35 -56 re
f
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
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/GS1 gs
0 Tc
-0.0001 Tw
(J. Guinea Viniegra y cols.)Tj
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26.77 48 24.01 -17.01 re
f
Q
q
1 i
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0 822 m
W n
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W n
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/GS1 gs
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0 Tw
(30)Tj
ET
0 0 0 0 k
26.77 691.61 490.35 -188.61 re
f
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
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W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0002 Tc
0 Tw
(Summary)Tj
ET
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q
1 i
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0196 Tw
[(The gene mutated in ataxia telangiectasia \(A)110.9(TM\) has been implicated in several functions such as cell cycle,)]TJ
-0.9767 -1.2727 TD
0.0251 Tw
[(response to DNA damage, and insulin. Curiously)65(, the PKB/Akt-mediated signaling route is related to the same)]TJ
T*
0.0104 Tc
0.1145 Tw
[(cellular responses. W)79.9(e)0( show in this work that A)110.8(TM is a major determinant of full PKB/Akt activation in)]TJ
T*
0.0304 Tc
0.0945 Tw
(response to insulin or )Tj
ET
Q
q
1 i
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()Tj
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Q
q
1 i
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0.015 822.015 540.99 -822 re
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BT
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0304 Tc
0.0945 Tw
(-radiation. This conclusion was inferred from the results obtained in transient)Tj
-10.3515 -1.2727 TD
0 Tc
0.0249 Tw
[(transfection assays using exogenous PKB/Akt and A)110.9(TM in Cos cells, and also in cell lines derived from ataxia)]TJ
T*
0.0284 Tw
[(telangiectasia patients or KO mice. Our study proposes new clues to understand the radiosensitivity associated)]TJ
T*
0 Tw
(to ataxia telangiectasia and supports a critical role for PKB/Akt in the cellular response to ionizing radiation.)Tj
ET
Q
q
1 i
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-0.0001 Tc
0 Tw
(Key words:)Tj
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Q
q
1 i
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0 Tw
[(Ataxia telangiectasia. A)110.9(T)0(M. Akt. Radiosensitivity)65(.)]TJ
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Q
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/ProcSet [/PDF /Text ]
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/F2 7 0 R
/F3 14 0 R
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/GS1 8 0 R
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>>
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f
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q
1 i
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0244 Tc
0.1006 Tw
[(Philip Leder \(HHMI, escuela mdica de Harvad,)]TJ
0 -1.1818 TD
0 Tc
0.1095 Tw
[(Boston, MA, 021)36.9(15\). Las clulas IMR90 junto con)]TJ
T*
0.0311 Tc
0.0938 Tw
[(las anteriores fueron mantenidas en DMEM con)]TJ
T*
0.0005 Tc
0.1244 Tw
[(10% de suero fetal bovino \(Biowhittaker)39.7(, V)110.8(erviers,)]TJ
T*
0 Tc
0 Tw
(Belgium\) en 5% CO)Tj
6.6 0 0 6.6 116.8521 630.3343 Tm
(2)Tj
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(a 37C.)Tj
ET
Q
q
1 i
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0 0 0 1 k
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-0.0001 Tc
0 Tw
(Plsmidos y transfecciones)Tj
ET
Q
q
1 i
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W n
BT
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0423 Tw
[(Se han utilizado los siguientes plasmidos: Flag-6-)]TJ
-0.9767 -1.1818 TD
-0.0001 Tc
0.043 Tw
[(His A)110.8(TM \(wt\) en el vector PEBS7-YZ5 cedidos por)]TJ
T*
0.1129 Tw
[(el Dr)54.8(. Y)128.8(.)-0.1( Silo \(Universidad de T)69.8(el A)73.9(viv)64.8(, escuela de)]TJ
T*
0 Tc
0.0671 Tw
(medicina, Israel\). Akt wt marcado con hemaglutini-)Tj
T*
0.0413 Tw
(na\(HA\), kinasa inactivo y miristoilado en el plsmi-)Tj
T*
0.1246 Tw
[(do pCEFL, fueron amablemente cedidos por el Dr)54.9(.)]TJ
T*
0.043 Tc
0.0819 Tw
[(S. Gutking \(NIDCR, NIH, Bethesda, MD\). Las)]TJ
T*
0.0298 Tc
0.0952 Tw
(transfecciones se realizaron con lipofectamina y)Tj
T*
0 Tc
0.0863 Tw
(posteriormente las clulas fueron seleccionadas con)Tj
T*
0 Tw
(G418 o hygromicina .)Tj
ET
Q
q
1 i
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W n
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W n
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0176 Tc
0.0293 Tw
[(Anticuerpos, W)54.9(estern blot e inmunopr)17.8(ecipitaciones)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 37.4765 410.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(Se han utilizado los siguientes anticuerpos:)Tj
0 -1.1818 TD
0.007 Tc
0.118 Tw
(El fosfo-anticuerpo especfico contra la Ser 473)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.055 Tw
[(de Akt fue obtenido de Cell Signaling T)69.8(echnologies)]TJ
T*
0.0223 Tc
0.1026 Tw
[(\(CST)73.9(, Beverly)64.9(, MA\). Los anticuerpos contra Akt)]TJ
T*
-0.0002 Tc
0 Tw
(IR)Tj
ET
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q
1 i
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()Tj
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Q
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1 i
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W n
BT
/F1 1 Tf
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.1029 Tw
[(y HA fueron obtenidos de Santa Cruz Biotech)]TJ
-1.9838 -1.1818 TD
0.0105 Tc
0.1144 Tw
(\(Santa Cruz, CA\). Los ensayos quinasa de Akt se)Tj
T*
0 Tc
0.0766 Tw
[(desarrollaron con un kit no radiactivo de CST)74(. Para)]TJ
T*
-0.0001 Tc
0.0677 Tw
(los ensayos de fosforilacin de Akt, las clulas fue-)Tj
T*
0 Tc
0.0066 Tw
[(ron tratadas y recolectadas en buf)17.8(fer de lisis \(25 mM)]TJ
T*
0.0233 Tc
0.1017 Tw
(Hepes pH 7.5, 0.3 M NaCl, 1.5 mM MgCl2, 0.2)Tj
T*
0.0355 Tc
0.0894 Tw
[(mM EDT)79.8(A, 1% T)34.9(riton X-100, 0.1% SDS, 0.5%)]TJ
T*
0.0251 Tc
0.0999 Tw
(cido Deoxiclico, 20 mM )Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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W n
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0 Tc
0 Tw
()Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 168.0715 267.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.025 Tc
0.0999 Tw
(-glicerolfosfato\) en)Tj
-12.8489 -1.1818 TD
0.0125 Tc
0.1124 Tw
[(presencia de inhibidores de proteasas y fosfatasas)]TJ
T*
0.0002 Tc
0.1248 Tw
(\(20 g/ml aproteinina, 20 )Tj
ET
Q
q
1 i
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0 822 m
W n
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W n
BT
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
()Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 154.0162 241.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0002 Tc
0.1248 Tw
(g/ml leupeptina, 1 mM)Tj
-11.5712 -1.1818 TD
-0.0001 Tc
0.0003 Tw
[(PMSF)79.8(, 0.1 mM Na3VO4, 20 mM NaF y 1 mM NaP-)]TJ
T*
0.0882 Tw
[(Pi\). Los lisados fueron recogidos en el mismo tam-)]TJ
T*
0.0149 Tc
0.1101 Tw
(pn que en los ensayos quinasa y procesados por)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(W)Tj
0.874 0 TD
0.01 Tc
0.115 Tw
(estern blot \(normalmente 50 )Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F4 1 Tf
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
()Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 178.0017 189.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.01 Tc
0.115 Tw
(g\) o mediante in-)Tj
-13.7517 -1.1818 TD
0 Tc
0.0587 Tw
(munoprecipitacin usando anticuerpos especficos y)Tj
T*
0.0026 Tw
(protena G \(Amershan Pharmacia\). Los inmunocom-)Tj
T*
0.0007 Tc
0.1242 Tw
[(plejos se lavaron y resuspendieron en un buf)17.8(fer de)]TJ
T*
0 Tc
0.0632 Tw
[(car)17.8(ga 5x. La deteccin del anticuerpo se realiz por)]TJ
T*
0.0067 Tc
0.1183 Tw
(quimioluminiscencia \(ECL, Amersham Pharmacia,)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(Uppsala, Sweden\).)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
11 0 0 11 26.7332 85.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(T)Tj
0.593 0 TD
-0.0001 Tc
(ratamientos)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 37.4765 59.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0294 Tc
0.0956 Tw
(Las clulas fueron tratadas con insulina Novo)Tj
22.4849 56.7273 TD
-0.0001 Tc
0.1135 Tw
(Nordisk \(Bagsvaerd, Denmark\) durante 30 minutos)Tj
0 -1.1818 TD
0 Tc
0.0693 Tw
(a las dosis indicadas. Las clulas se sometiron a ra-)Tj
T*
0.0852 Tw
(diacin gamma usando una fuente de cobalto \(The-)Tj
T*
0.0149 Tw
(ratron 780 AECL, Canada\) a un SSD de 57cm y una)Tj
T*
0.1022 Tw
(tasa de 285 cGy/min. Las clulas se mantuvieron a)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.118 Tw
(37C y 5% CO)Tj
6.6 0 0 6.6 354.1353 617.3343 Tm
0 Tc
0 Tw
(2)Tj
11 0 0 11 361.4825 618.9843 Tm
0.1179 Tw
(durante 7 das tras la radiacin en)Tj
-6.9702 -1.1818 TD
0.0044 Tc
0.1206 Tw
(los ensayos de viabilidad y durante 30 minutos en)Tj
T*
0 Tc
0.0347 Tw
[(los ensayos quinasa. Los pre-tratamientos con cafe-)]TJ
T*
0.001 Tc
0.124 Tw
(na \(Sigma\) fueron a una dosis de 2 mM durante 1)Tj
T*
0 Tc
0.1232 Tw
(hora en los casos indicados. La seleccin de trans-)Tj
T*
0.0139 Tc
0.1111 Tw
(fectantes estables se realizo por higromicina \(Ro-)Tj
T*
0 Tc
0.0369 Tw
(che\) a dosis de 50 )Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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/GS1 gs
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()Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0369 Tw
[(g/ml o G418 \(Sigma\) a dosis de)]TJ
-8.1743 -1.1818 TD
0 Tw
(750 )Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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W n
BT
/F4 1 Tf
11 0 0 11 304.0606 527.9843 Tm
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0 Tc
0 Tw
()Tj
ET
Q
q
1 i
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0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 310.3958 527.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(g/m.l)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
11 0 0 11 284.8106 501.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
(Citometra de flujo)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 295.5539 475.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0738 Tw
[(Las clulas fueron lavadas con PBS y fijadas du-)]TJ
-0.9767 -1.1818 TD
0.1062 Tw
(rante 30 minutos con etanol al 70% a -20 C. Des-)Tj
T*
0.0485 Tw
(pus fueron nuevamente lavadas resuspendidas en 1)Tj
T*
0.0286 Tc
0.0964 Tw
[(ml de PBS con ioduro de propidio \(10 )]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F4 1 Tf
11 0 0 11 475.406 436.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
()Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
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W n
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W n
BT
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11 0 0 11 482.0557 436.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0286 Tc
0.0964 Tw
(g/ml\) y)Tj
-17.9314 -1.1818 TD
-0.0001 Tc
0.096 Tw
(RNAsa \(20 )Tj
ET
Q
q
1 i
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0 822 m
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0 Tc
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()Tj
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0.0961 Tw
(g/ml\). Las muestras fueron analizadas)Tj
-5.5443 -1.1818 TD
0 Tc
0.1087 Tw
(con Epics XL \(Coulter Electronics\). Aquellas clu-)Tj
T*
0.0033 Tc
0.1217 Tw
(las con DNA con menor marcaje que la poblacin)Tj
T*
0.0162 Tc
0.1088 Tw
(celular en G1 son consideradas como apoptticas)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(\(pico sub-G1\). )Tj
ET
Q
q
1 i
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/GS1 gs
-0.0002 Tc
0 Tw
(Resultados)Tj
11 0 0 11 284.8106 306.9843 Tm
-0.0001 Tc
[(Las lneas celular)17.7(es derivadas de pacientes de A)73.9(T)]TJ
0 -1.1818 TD
[(o de ratones nulos para A)73.9(TM son incapaces)]TJ
T*
[(de fosforilar la serina473 de Akt en r)17.7(espuesta)]TJ
T*
(a insulina)Tj
ET
Q
q
1 i
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0045 Tc
0.0631 Tw
(En un primer intento, usamos insulina, un potente)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0744 Tw
(activador de Akt, en un modelo experimental de c-)Tj
T*
0.0023 Tw
(lulas GM08931 \(fibroblastos derivados de un pacien-)Tj
T*
0.015 Tw
[(te con A)110.9(T\), usando como control clulas IMR90. Las)]TJ
T*
0.0302 Tw
(clulas se incubaron en medio sin suero durante toda)Tj
T*
0.0653 Tw
(una noche para evaluar la fosforilacin de la Ser473)Tj
T*
0.0389 Tw
[(de Akt. Las clulas que carecan de la protena A)111(T)0.2(M)]TJ
T*
0.1174 Tw
(mostraban un claro descenso de la fosforilacin so-)Tj
T*
0.0447 Tw
(bre la serina473 respecto a la lnea control tras trata-)Tj
T*
0.0627 Tw
[(miento con insulina \(Fig. 1a\). Sin embar)18(go, como el)]TJ
T*
0.0144 Tw
(fondo gentico entre las IMR90 y las GM08931 pue-)Tj
T*
0.0484 Tw
(de ser muy diferente, decidimos usar otra lnea celu-)Tj
T*
0.0853 Tw
(lar derivada de otro paciente y de un hermano hete-)Tj
T*
-0.0031 Tc
0.1235 Tw
(rocigoto, GM09607\(-/-\) y GM00637\(-/+\). Para ase-)Tj
T*
-0.0046 Tc
0.1104 Tw
[(gurarnos de si las diferencias observadas eran debi-)]TJ
ET
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q
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
-0.0001 Tw
(Oncologa, 2005; 28 \(7\):329-337)Tj
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(31)Tj
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0 Tc
-0.0001 Tw
(J. Guinea Viniegra y cols.)Tj
ET
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f
Q
q
1 i
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0 Tc
0 Tw
(32)Tj
ET
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Q
Q
q
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q
472.5591 0 0 168.8158 44.77 345.5042 cm
/Im2 Do
Q
Q
q
1 i
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/GS1 gs
q
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/Im3 Do
Q
Q
q
1 i
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/GS1 gs
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f
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/F1 1 Tf
9 0 0 9 26.7705 158.8302 Tm
0 0 0 1 k
0 Tc
0.0015 Tw
(Figura 1. Las lneas celulares derivadas de pacientes de AT son defectivas en la fosforilacin de la serina 473 de AKT en respu)Tj
50.871 0 TD
(esta a in-)Tj
-49.797 -1.1948 TD
0 Tw
(sulina.)Tj
-1.074 -1.1948 TD
0.0981 Tw
(a\) Las lneas celulares IMR90 y GM08391 se trataron durante 30 minutos con cantidades crecientes de insulina y posteriormente s)Tj
54.0392 0 TD
0 Tw
(e)Tj
-52.9652 -1.1948 TD
(evalu la fosforilacin de AKT en la serina 473. Se us AKT total como control de carga.)Tj
-1.074 -1.1948 TD
(La figura muestra un inmunoblot representativo de una serie de tres experimentos )Tj
T*
0.029 Tw
(b\) Las lneas celulares GM00637, GM09607 y GM09607 Atm wt que expresa ATM tipo salvaje se trataron con insulina y se evalu la)Tj
1.074 -1.1948 TD
0.0409 Tw
(fosforilacin de Akt endgeno. Se us Akt total como control de carga. la figura muestra un inmunoblot representativo de una se)Tj
52.3545 0 TD
0 Tw
(rie)Tj
-52.3545 -1.1948 TD
(de tres experimentos )Tj
-1.074 -1.1948 TD
0.0189 Tw
(C\) Se midieron los niveles de la subunidad a del receptor de insulina. Como control de carga se utilizo los niveles totales de )Tj
50.1972 0 TD
(Akt. La fi-)Tj
-49.1232 -1.1948 TD
0 Tw
(gura muestra un inmunoblot representativo de una serie de tres experimentos )Tj
ET
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0511 Tc
0.0789 Tw
(das especficamente a la falta de expresin de)Tj
-0.0245 -1.1818 TD
0 Tc
0 Tw
(A)Tj
0.6161 0 TD
0.005 Tc
0.0311 Tw
[(TM, transfectamos A)110.9(TM salvaje en las clulas de-)]TJ
-0.6161 -1.1818 TD
0.012 Tc
0.1179 Tw
[(ficientes de A)110.8(T)73.9(. Como esperbamos, en las lneas)]TJ
T*
0.0049 Tc
0.0129 Tw
[(celulares en las que sobre expresamos el A)110.8(T)-0.1(M ect-)]TJ
T*
0.0203 Tc
0.1096 Tw
(pico se reestableca la fosforilacin de la Ser473)Tj
T*
0.005 Tc
0.0559 Tw
(\(Fig. 1b\). Para excluir que el receptor de insulina o)Tj
T*
0.0067 Tc
0.1233 Tw
(alguno de los intermediarios estuviera afectado en)Tj
T*
0.0051 Tc
0.1248 Tw
[(las clulas deficientes para A)110.6(T)-0.1(M, medimos los ni-)]TJ
T*
0.005 Tc
0.1157 Tw
(veles del receptor de insulina \(IR\) y la funcionali-)Tj
T*
0.073 Tw
(dad de la va. No se observ ninguna diferencia en)Tj
T*
0.0255 Tw
[(los niveles de expresin de RI \(Fig. 1c\). Sin embar-)]TJ
T*
0.0302 Tw
(go, nuestras primeras observaciones podran ser de-)Tj
T*
0.0149 Tw
(bidas a diferentes respuestas especficas en nuestros)Tj
T*
0.0172 Tc
0.1128 Tw
(modelos experimentales \(dos lneas celulares con)Tj
T*
0.0234 Tc
0.1066 Tw
(diferente fondo gentico respecto de su control\).)Tj
T*
0.005 Tc
0.0865 Tw
(Por consiguiente, decidimos usar un modelo biol-)Tj
T*
0.033 Tc
0.097 Tw
(gico con idntico fondo gentico idntico como)Tj
T*
0.027 Tc
0.1029 Tw
(pueden ser los fibroblasto murinos embrionarios)Tj
T*
0.0049 Tc
0.0838 Tw
[(\(MEF\) derivados de ratones nulos para A)110.8(TM y sus)]TJ
23.4861 21.2727 TD
0.0562 Tw
(correspondientes controles)Tj
6.6 0 0 6.6 404.7117 297.6143 Tm
0 Tw
(17)Tj
11 0 0 11 411.3778 293.9843 Tm
0.0562 Tw
(. De nuevo, se obtuvie-)Tj
-11.5061 -1.1818 TD
0.0493 Tw
(ron los mismos resultados en trminos de fosforila-)Tj
T*
0.0538 Tw
(cin de Akt, funcionalidad de la va y expresin de)Tj
T*
0.0137 Tw
[(los RI \(Fig. 2a, b\). De hecho, la reinstauracin de la)]TJ
T*
0.0694 Tw
[(expresin de A)110.8(TM fue capaz de recuperar la fosfo-)]TJ
T*
0 Tw
(rilacin de la serina473 \(Fig. 2a, b\).)Tj
ET
Q
q
1 i
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W n
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/F2 1 Tf
11 0 0 11 284.8106 202.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
[(La activacin defectiva de Akt corr)17.7(elaciona)]TJ
0 -1.1818 TD
[(con la radio sensibilidad asociada a A)73.9(T)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 295.5539 163.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.1151 Tw
(El uso de un solo estmulo \(insulina\) no permite)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0293 Tw
[(proponer un mecanismo general en el que A)110.8(TM est)]TJ
T*
0.0092 Tc
0.1158 Tw
(controlando la actividad de Akt. Por tanto, proba-)Tj
T*
0 Tc
0.0464 Tw
[(mos otro estmulo bien descrito para A)110.8(TM, como es)]TJ
T*
0.075 Tc
0.1327 Tw
(la radiacin ionizante. Para ello las clulas)Tj
T*
0 Tc
0.0202 Tw
(GM09607 y GM00637 fueron sometidas a radiacin)Tj
T*
0.1195 Tw
(ionizante y posteriormente analizadas mediante en-)Tj
T*
0.0694 Tw
(sayo quinasa in vitro para comprobar la actividad)Tj
T*
0.0568 Tw
[(de Akt. En las clulas de A)110.9(T)0( se detect una falta de)]TJ
ET
0 0 0 1 K
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S
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f
Q
q
1 i
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
-0.0001 Tw
(Oncologa, 2005; 28 \(7\):329-337)Tj
ET
0 0 0 0 k
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f
Q
q
1 i
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W n
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0 Tw
(33)Tj
ET
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Q
q
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W* n
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/GS1 gs
q
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/Im4 Do
Q
Q
q
1 i
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/GS1 gs
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q
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/GS1 gs
q
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/Im5 Do
Q
Q
q
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S
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f
BT
/F1 1 Tf
9 0 0 9 26.7332 376.8455 Tm
0 0 0 1 k
0 Tc
0 Tw
(Figura 2. Las clulas KO para ATM son defectivas en la fosforilacin de la serina 473 de Akt en la respuesta a insulina.)Tj
0 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
0.0381 Tw
(A\) Las lneas celulares KO \(p53 -/-, ATM +/+\), doble KO \(p53 -/-, ATM -/-\) y doble KO ATM fueron incubados con Insulina 100nM)Tj
1.074 -1.1948 TD
0 Tc
0.0149 Tw
(durante 30 minutos y posteriormente se evalu la fosforilacin en la Serina 473 de akt. al igual que en la figura 1 se tomo com)Tj
50.8675 0 TD
(o con-)Tj
-50.8675 -1.1948 TD
0 Tw
(trol carga el nivel total de Akt. la figura muestra un inmunoblot representativo de una serie de tres experimentos )Tj
-1.074 -1.1948 TD
0.0348 Tw
(B\) Evaluacin los niveles de la subunidad a del receptor de insulina. Como control de carga se utilizo los niveles totales de A)Tj
50.8876 0 TD
(kt. La fi-)Tj
-49.8136 -1.1948 TD
0 Tw
(gura muestra un inmunoblot representativo de una serie de tres experimentos )Tj
ET
Q
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-0.0001 Tw
(J. Guinea Viniegra y cols.)Tj
ET
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Q
q
1 i
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(34)Tj
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Q
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Q
Q
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0 Tw
(Figura 3. La falta de actividad de Akt correlaciona con un fenotipo sensible a la radiacin ionizante.)Tj
0 -1.1948 TD
0.0541 Tw
(A\) Ensayo quinasa in vitro de la actividad de Akt en clulas GM00637, GM09607 y GM09607 expresando ATM \(salvaje 9607 ATM)Tj
1.074 -1.1948 TD
0.0089 Tw
[(wt\) 30 minutos despus de una exposicin de 20 Gy. Los valores \(unidades arbitrarias\) fueron normalizados respecto a los nivele)]TJ
51.8172 0 TD
(s de)Tj
-51.8172 -1.1948 TD
0.0638 Tw
(Akt total determinado por inmunoblot. Se muestra un experimento representativo de tres. SD =desviacin estandar. Curva de dosis)Tj
T*
0.0086 Tw
(repuesta a radiacin ionizante en clulas GM09607 \()Tj
ET
Q
q
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-0.0001 Tc
0.0087 Tw
(\) y GM09607 expresando ATM wt \()Tj
ET
Q
q
1 i
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()Tj
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-0.0001 Tc
0.0087 Tw
(\). las clulas fueron irradiadas a diferen-)Tj
-37.2289 -1.1948 TD
0 Tc
0.0245 Tw
(tes dosis y la viabilidad se evalu a los 7 das. Los resultado muestran la media con desviaciones estndar de tres experimento)Tj
50.8859 0 TD
(s. \(pa-)Tj
-50.8859 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
0 Tw
(nel inferior\).)Tj
-1.074 -1.1948 TD
0.0117 Tw
(B\) Ensayo quinasa in vitro de la actividad de Akt en KO p53, DKO, or DKO ATM expresando ATM salvaje \(DKO ATM wt\) 30 minu-)Tj
1.074 -1.1948 TD
0 Tc
0.0495 Tw
(tos despus de una exposicin de 20 Gy. Los valores \(unidades arbitrarias \) fueron normalizados respecto a los niveles de Akt t)Tj
51.9097 0 TD
0 Tw
(otal)Tj
-51.9097 -1.1948 TD
0.0345 Tw
(determinado por inmunoblot. Se muestra un experimento representativo de tres. SD =desviacin estndar. Curva de dosis repuesta )Tj
52.9651 0 TD
0 Tw
(a)Tj
-52.9651 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
0.0515 Tw
(radiacin ionizante en clulas KO \(O\), DKO \()Tj
ET
Q
q
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()Tj
ET
Q
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/GS1 gs
-0.0002 Tc
0.0515 Tw
[(\) or DKO ATM \()]TJ
ET
Q
q
1 i
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()Tj
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Q
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0 Tc
0.0514 Tw
(\). Las clulas fueron irradiadas a diferentes dosis y la viabilidad)Tj
-27.3787 -1.1948 TD
0 Tw
(se evalu a los 7 da. Los resultado muestran la media con desviaciones estndar de tres experimentos. \(panel inferior\). )Tj
-1.074 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
0.0107 Tw
(C\) evaluacin de apoptosis tras irradiacin con 8 Gy en clulas KO \(p53 -/-, ATM +/+\), Doble KO \(p53 -/-, ATM -/-\) y DKO ATM ex)Tj
54.1502 0 TD
0 Tc
0 Tw
(-)Tj
-53.0762 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
(presando ATM salvaje.)Tj
ET
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0 Tc
0.0183 Tw
(actividad de Akt que correlacionaba con un fenotipo)Tj
-0.0245 -1.1818 TD
0.0277 Tc
0.0973 Tw
(sensible y que se reverta por sobreexpresin de)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(A)Tj
0.6111 0 TD
-0.0001 Tc
0.0056 Tw
[(TM salvaje exgeno \(Fig. 3a\). Los mismos resulta-)]TJ
-0.6111 -1.1818 TD
0 Tc
0.0848 Tw
(dos se obtuvieron en el modelo derivado de clulas)Tj
T*
0.0465 Tc
0.0784 Tw
[(KO \(Fig. 3b\). T)69.8(a)0(mbin evaluamos la respuesta)]TJ
T*
0.0066 Tc
0.1184 Tw
(apopttica a la radiacin ionizante en este modelo)Tj
T*
0.0072 Tc
0.1178 Tw
[(experimental. Este dato apoya el papel crtico que)]TJ
T*
0 Tc
0.0418 Tw
(tiene la activacin de Akt en respuesta a radiacin a)Tj
T*
0.0988 Tw
(travs del control de la inhibicin de la maquinaria)Tj
T*
0 Tw
(apopttica.)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
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W n
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11 0 0 11 285.0803 176.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0.0001 Tw
(Papel de Akt en el ciclo celular y supervivencia)Tj
-0.0245 -1.1818 TD
0 Tw
(en una lnea celular derivada de un paciente)Tj
T*
-0.0002 Tc
0.0001 Tw
[(de A)73.8(T)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 295.5539 124.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(T)Tj
0.5535 0 TD
0.0125 Tc
0.0093 Tw
[(odos nuestros resultados indicaban una correla-)]TJ
-1.5302 -1.1818 TD
0.0711 Tw
(cin entre la falta de activacin de Akt asociada a)Tj
T*
0.0353 Tw
[(una disfuncin de A)110.9(TM y la respuesta celular a ra-)]TJ
T*
0.014 Tc
0.1235 Tw
(diacin ionizante: Entonces, decidimos evaluar el)Tj
T*
0.0125 Tc
0.0945 Tw
[(papel de la inhibicin de A)110.9(T)0(M respecto del punto)]TJ
T*
0.0212 Tc
0.1163 Tw
[(de control G2/M del ciclo celular)54.9(. Este punto de)]TJ
ET
0 0 0 1 K
0 J 0 j 0.5 w 10 M []0 d
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q
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
-0.0001 Tw
(Oncologa, 2005; 28 \(7\):329-337)Tj
ET
0 0 0 0 k
493.07 48 24.01 -17.01 re
f
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
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0 Tc
0 Tw
(35)Tj
ET
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Q
q
1 i
26.73 691.61 490.35 -427.92 re
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0 0 0 1 k
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q
472.782 0 0 424.4428 44.73 267.3271 cm
/Im8 Do
Q
Q
q
1 i
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0 822 m
W n
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/GS1 gs
26.73 691.61 490.35 -218.92 re
f
Q
q
1 i
26.73 691.61 490.35 -218.92 re
W* n
0 0 0 1 k
/GS1 gs
q
480.7037 0 0 219.2088 27.73 472.5811 cm
/Im9 Do
Q
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
0 0 0 0 k
/GS1 gs
26.73 256.85 490.35 -69.81 re
f
BT
/F1 1 Tf
9 0 0 9 26.7332 250.6923 Tm
0 0 0 1 k
0 Tc
0 Tw
(Figura 4. Papel de Akt en la respuesta a radiacin ionizante en clulas derivadas de enfermos de AT)Tj
0 -1.1948 TD
0.0436 Tw
(A\) las clulas GM00637, GM09607 fueron irradiadas con 8 Gy y se evalu el porcentaje de celulas en G2/M por citometra de flujo)Tj
53.7456 0 TD
0.0436 Tc
0 Tw
( a)Tj
-52.6716 -1.1948 TD
0 Tc
(diferentes tiempos en presencia/ausencia de cafena \(100mM\) una hora antes de la irradiacin)Tj
-1.074 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
0.0707 Tw
[(B\) la clulas GM09607 fueron establemente transfectadas con una forma hiperactiva \(MYR\) o una forma inactiva \(KD\) de Akt. Tras)]TJ
1.074 -1.1948 TD
0 Tc
0 Tw
(dos semanas de seleccin con G418 se realizaron ensayos de viabilidad como los descritos en la figura 3Ay 3B. )Tj
ET
0 0 0 1 K
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11 0 0 11 26.7705 683.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0125 Tc
0.0725 Tw
(restriccin del ciclo celular est fuertemente regu-)Tj
0 -1.1818 TD
0.0467 Tw
(lado por Akt y curiosamente, es defectivo en clu-)Tj
T*
0.0224 Tc
0.115 Tw
[(las deficientes para A)110.8(TM. As, clulas GM637 y)]TJ
T*
0.024 Tc
0.1134 Tw
(GM9607 fueron pre-tratadas con cafena, un po-)Tj
T*
0.0283 Tc
0.1092 Tw
[(tente inhibidor de A)110.8(TM, y luego irradiadas eva-)]TJ
T*
0.0318 Tc
0.1057 Tw
(lundose posteriormente la fase G2/M mediante)Tj
T*
0.0125 Tc
0.0763 Tw
(ensayos de citometra de flujo \(Fig. 4a\). Las clu-)Tj
T*
0.0357 Tc
0.1017 Tw
[(las A)110.9(T)0(M positivas eran sensibles a la cafena y)]TJ
T*
0.0125 Tc
0.003 Tw
(mostraban un incremento de la fase G2/M del ciclo)Tj
T*
0.0479 Tw
[(celular especialmente a las 16 horas. Sin embar)18(go,)]TJ
T*
0.0186 Tc
0.1189 Tw
[(las clulas deficientes para A)110.9(TM no modificaban)]TJ
T*
0.0125 Tc
0.0691 Tw
(el punto de control G2/M en presencia de cafena.)Tj
T*
0.047 Tc
0.0905 Tw
(Hay que destacar que el incremento en la fase)Tj
T*
0.0125 Tc
0.0569 Tw
(G2/M ha estado siempre relacionado con una falta)Tj
T*
0.0235 Tc
0.114 Tw
[(de la activacin de Akt. Pero, probablemente, la)]TJ
T*
0.0125 Tc
0.0518 Tw
(evidencia ms fuerte para apoyar que Akt tiene un)Tj
T*
0.0084 Tw
[(papel en la sensibilidad asociada a A)111(T)0(M podra ve-)]TJ
T*
0.0262 Tc
0.1113 Tw
(nir de un abordaje gentico basado en el uso de)Tj
T*
0.0125 Tc
0.0051 Tw
(una forma hiperactiva y una forma inactiva de Akt.)Tj
T*
0.0524 Tc
0.085 Tw
(Para ello las clulas GM9607, defectivas para)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(A)Tj
0.6236 0 TD
0.0125 Tc
0.0666 Tw
[(TM, fueron transfectadas con una forma inactiva)]TJ
-0.6236 -1.1818 TD
0.0314 Tw
(o hiperactiva de Akt. Las clulas que fueron selec-)Tj
T*
0.1025 Tw
(cionadas y mantenidas en cultivo con los diferen-)Tj
T*
0.0668 Tw
(tes mutantes de Akt fueron sometidas a un ensayo)Tj
T*
0.0196 Tc
0.1179 Tw
(de viabilidad y a una comprobacin de la expre-)Tj
T*
0.0126 Tc
0.0047 Tw
(sin del epitopo HA \(datos no mostrado\).Como ca-)Tj
T*
0.0725 Tw
[(ba esperar)39.8(, la forma inactiva de Akt no modifica-)]TJ
T*
0.1141 Tw
(ba las curvas de viabilidad mientras que la forma)Tj
T*
0.1249 Tw
(hiperactiva \(Myr\) era capaz de reestablecer la ra-)Tj
T*
0.0357 Tc
0.1018 Tw
(dio resistencia de una manera similar a los que)Tj
T*
0.0352 Tc
0.1022 Tw
[(presentaban los transfectantes con A)111(TM salvaje)]TJ
T*
0.0125 Tc
0.0844 Tw
(\(Fig. 4b\). En resumen, estos experimentos apoyan)Tj
T*
0.0493 Tw
(sin lugar a dudas, un papel crtico de Akt en la ra-)Tj
T*
0 Tw
[(dio sensibilidad asociada a A)111(TM.)]TJ
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
14 0 0 14 26.7705 215.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
(Discusin )Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
11 0 0 11 37.5138 189.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0255 Tw
(Del presente trabajo se pueden extraer varias con-)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0418 Tw
(clusiones. La primera conclusin clara es la interco-)Tj
T*
0.0088 Tc
0.1162 Tw
[(nexin entre estas dos protenas, Akt y A)110.7(TM, que)]TJ
T*
0 Tc
0.0294 Tw
(presentan un papel critico en el mantenimiento de la)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.0001 Tw
[(homeostasis celular)54.8(.)]TJ
0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.0327 Tw
(Desde el punto de vista mecanstico nuestro datos)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0762 Tw
[(demuestran de forma inequvoca que A)110.9(TM controla)]TJ
T*
0.0226 Tw
(la activacin completa de Akt va el control ejercido)Tj
T*
0.0259 Tw
(en al serina 473, o al menos los mecanismo molecu-)Tj
T*
0.009 Tc
0.116 Tw
(lares que determina la fosforilacin de dicho resi-)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.0929 Tw
[(duo. No obstante, son necesarios ms estudios para)]TJ
23.4616 56.7273 TD
0.0219 Tc
0.103 Tw
[(determinar las protenas afectadas por A)110.8(TM para)]TJ
0 -1.1818 TD
0 Tc
0 Tw
(controlar la actividad de Akt. )Tj
0.9767 -1.1818 TD
0.0464 Tw
(En lo referente a la resistencia a insulina nuestros)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.01 Tc
0.115 Tw
(datos demuestran que la falta de actividad de Akt)Tj
T*
0.022 Tc
0.103 Tw
(puede ser uno de los mecanismos, que junto con)Tj
T*
0.0044 Tc
0.1205 Tw
(otros ya descritos como 4EBPI)Tj
6.6 0 0 6.6 427.8179 622.6143 Tm
0 Tw
(18)Tj
11 0 0 11 434.477 618.9843 Tm
0.1206 Tw
(, pueden justificar)Tj
-13.6026 -1.1818 TD
0 Tc
0.0771 Tw
[(los fenmenos de resistencia a insulina descritos en)]TJ
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
[(enfermos de A)110.8(T)73.9(.)]TJ
0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.1025 Tw
(Por otro lado en la radio sensibilidad, una de las)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0113 Tc
0.1137 Tw
(caractersticas ms interesante de los enfermos de)Tj
T*
-0.1111 Tc
0 Tw
(AT)Tj
1.148 0 TD
0 Tc
0.0837 Tw
(, la falta de actividad de Akt posiblemente tenga)Tj
-1.148 -1.1818 TD
0.0013 Tw
(una de las implicaciones ms directas. Por un lado la)Tj
T*
0.0156 Tc
0.1094 Tw
(falta de actividad de Akt ha sido relacionada con)Tj
T*
0 Tc
0.1132 Tw
(sensibilidad y la hiperactividad ha sido relacionada)Tj
T*
0.0504 Tw
(con resistencia ala quimio y radioterapia)Tj
6.6 0 0 6.6 465.6733 505.6143 Tm
0 Tw
(12)Tj
11 0 0 11 472.2734 501.9843 Tm
-0.0001 Tc
0.0504 Tw
(. Adems,)Tj
-17.0387 -1.1818 TD
0 Tc
0.0476 Tw
(los ratones nulos para la expresin de Akt han mos-)Tj
T*
0.0061 Tc
0.1189 Tw
(trado un claro patrn de radio sensibilidad)Tj
6.6 0 0 6.6 481.3063 479.6143 Tm
0.0062 Tc
0 Tw
(16)Tj
11 0 0 11 487.9875 475.9843 Tm
0.0061 Tc
0.1188 Tw
(. Ade-)Tj
-18.4672 -1.1818 TD
0 Tc
0.0719 Tw
[(ms, el caracterstico incremento en G2/M observa-)]TJ
T*
0.0846 Tw
[(do en las clulas de enfermos de A)110.8(T)0.1( tras la exposi-)]TJ
T*
0.016 Tc
0.109 Tw
(cin a radiacin ionizante)Tj
6.6 0 0 6.6 406.3246 440.6143 Tm
0 Tw
(19)Tj
11 0 0 11 413.1358 436.9843 Tm
0.1091 Tw
(, puede ser justificado)Tj
-11.6625 -1.1818 TD
0 Tc
0.0363 Tw
(por la baja/nula actividad de Akt observada en estos)Tj
T*
0.0328 Tw
(modelos celulares, debido a que Akt es una protena)Tj
T*
0.0618 Tw
(critica en la transicin del punto de control G2/M)Tj
6.6 0 0 6.6 507.7675 401.6143 Tm
0 Tw
(20)Tj
11 0 0 11 514.3675 397.9843 Tm
(.)Tj
-20.8654 -1.1818 TD
0.0045 Tw
(Por tanto, nosotros proponemos un modelo en el que)Tj
T*
0.0076 Tc
0.1174 Tw
(la actividad de Akt, en respuesta a radiacin ioni-)Tj
T*
0 Tc
0.0884 Tw
[(zante, es controlada por A)110.9(TM y otras protenas an)]TJ
T*
0.0016 Tc
0.1234 Tw
[(desconocidas. En este sentido las PI3K convencio-)]TJ
T*
0 Tc
0.1129 Tw
(nales no seran por tanto criticas para la activacin)Tj
T*
0.0002 Tc
0.1248 Tw
(final de Akt como ha sido demostrado en modelos)Tj
T*
0 Tc
0.0272 Tw
(de carcinoma epidermoide)Tj
6.6 0 0 6.6 402.106 310.6143 Tm
0 Tw
(21)Tj
11 0 0 11 408.706 306.9843 Tm
0.0271 Tw
(. Desde un punto de vis-)Tj
-11.2598 -1.1818 TD
0.0021 Tc
0.1229 Tw
(ta teraputico nuestros resultados indican el poten-)Tj
T*
0.0058 Tc
0.1192 Tw
(cial radio sensibilizante de un inhibidor especifico)Tj
T*
0 Tc
0.1125 Tw
(de la activacin y/o actividad de Akt. En este con-)Tj
T*
0.0264 Tc
0.0986 Tw
(texto podramos aprovecharnos del efectos radio)Tj
T*
0 Tc
0.071 Tw
(sensibilizante debidos a la falta de actividad de Akt)Tj
T*
0.0019 Tw
(sin tener los efectos perjudiciales asociados a la falta)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
[(de A)110.8(T)73.9(. )]TJ
0.9767 -1.1818 TD
0 Tc
0.0372 Tw
(Adems, nuestra observacin de una falta de acti-)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0079 Tc
0.1171 Tw
[(vidad Akt observada en clulas deficientes en A)111(T)74(,)]TJ
T*
0.0252 Tc
0.0998 Tw
(puede servir como mecanismo parcial para otros)Tj
T*
0 Tc
0.0389 Tw
[(sntomas observados en enfermos y modelos anima-)]TJ
T*
0.1152 Tw
[(les de A)110.8(T)0( como son el hipogonadismo o el retardo)]TJ
T*
0.0416 Tw
(en el crecimiento como se ha observado en los rato-)Tj
T*
0 Tw
(nes deficientes para Akt1)Tj
6.6 0 0 6.6 396.3169 128.6143 Tm
(16)Tj
11 0 0 11 402.917 124.9843 Tm
(.)Tj
-9.7569 -1.1818 TD
0.0764 Tw
(En resumen y como conclusin principal, la falta)Tj
-0.9767 -1.1818 TD
0.0032 Tc
0.1218 Tw
[(de actividad o expresin del gen A)110.8(TM provoca un)]TJ
T*
0.0002 Tc
0.1248 Tw
(fenotipo radios sensible y ello es debido al control)Tj
T*
0 Tc
0.0153 Tw
(que ejerce sobre la Ser 473 de la protena Akt, quien)Tj
T*
0.0365 Tw
(en ultima instancia media la respuesta a la radiacin)Tj
ET
0 0 0 1 K
0 J 0 j 0.5 w 10 M []0 d
26.77 719.95 m
517.12 719.95 l
S
0 0 0 0 k
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f
Q
q
1 i
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0 822 m
W n
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W n
BT
/F2 1 Tf
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
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-0.0001 Tw
(J. Guinea Viniegra y cols.)Tj
ET
0 0 0 0 k
26.77 48 24.01 -17.01 re
f
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
10 0 0 10 26.7705 33.1601 Tm
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/GS1 gs
0 Tc
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(36)Tj
ET
Q
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q
1 i
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W n
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f
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
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/GS1 gs
0.0003 Tc
0.1247 Tw
(ionizante. El potencial teraputico de esta observa-)Tj
0 -1.1818 TD
0 Tc
0.0771 Tw
(cin puede permitir el desarrollo de protocolos ms)Tj
T*
0.0059 Tw
(especficos mediante el uso de agentes radio sensibi-)Tj
T*
0 Tw
(lizantes.)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
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0 0 0 1 k
/GS1 gs
-0.0001 Tc
0 Tw
(Agradecimientos:)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
10 0 0 10 37.4765 592.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0.0223 Tc
0.1027 Tw
(Esta trabajo ha sido financiado por proyectos de la)Tj
-1.0743 -1.3 TD
0 Tc
0.1123 Tw
(Fundacin Leticia Castillejo Castillo y del Fondo de In-)Tj
T*
0.0032 Tc
0.1217 Tw
(vestigaciones Sanitarias \(Proyecto 03/0763\) para RSP y)Tj
T*
0.0018 Tc
0.1232 Tw
(del Plan Nacional de I+D+I, Ministerio de Educacin y)Tj
T*
-0.0001 Tc
0.0344 Tw
[(Ciencia \(Proyecto SAF2003-02604\) para JMR. El trabajo)]TJ
T*
0.0019 Tc
0.1231 Tw
(de NM fue financiado por un Contrato asociado al pro-)Tj
T*
-0.0001 Tc
0 Tw
(yecto ISCIII-Intramural \(03/ESP27.\) )Tj
9 0 0 9 126.7397 454.4783 Tm
0 Tc
(Correspondencia: )Tj
0 -1.1948 TD
-0.0001 Tc
(Dr. R. Snchez-Prieto)Tj
T*
0 Tc
(Laboratorio de Oncologa Molecular)Tj
T*
(CRIB/ Facultad de Medicina)Tj
T*
(Universidad de Castilla la Mancha)Tj
T*
(Avda. de Almansa, s/n)Tj
T*
(E-02006 Albacete)Tj
T*
(E-mail: Ricardo.sanchez@uclm.es)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F2 1 Tf
14 0 0 14 26.7332 332.9843 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0 Tw
(Bibliografa)Tj
ET
Q
q
1 i
0 822 541 -822 re
0 822 m
W n
0.015 822.015 540.99 -822 re
W n
BT
/F1 1 Tf
9 0 0 9 31.2332 309.231 Tm
0 0 0 1 k
/GS1 gs
0 Tc
0.0201 Tw
[(1.)-661.7(Spacey SD, Gatti RA, Bebb G.The molecular basis and cli-)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0.0113 Tc
0.1137 Tw
(nical management of ataxia telangiectasia. Can J Neurol)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(Sci 2000; 27:184-91.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
0.0017 Tc
0.1232 Tw
[(2.)-660(Shiloh Y. ATM and related protein kinases: safeguarding)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tc
0 Tw
(genome integrity. Nat Rev Cancer 2003; 3:155-68.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
0.1052 Tw
[(3.)-661.7(Abraham RT. Cell cycle checkpoint signaling through the)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tw
(ATM and ATR kinases. Genes Dev 2001; 15:2177-96.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
-0.0001 Tc
0.0385 Tw
[(4.)-661.8(Khanna KK, Lavin MF, Jackson SP, Mulhern TD. ATM, a)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0.0136 Tc
0.1113 Tw
(central controller of cellular responses to DNA damage.)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(Cell Death Differ 2001; 8:1052-65.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
0.022 Tw
[(5.)-661.7(Pandita TK. ATM function and telomere stability. Oncoge-)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tw
(ne 2002; 21:611-8.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
0.0619 Tw
[(6.)-661.7(Hunter T. When is a lipid kinase not a lipid kinase? When)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tw
(it is a protein kinase. Cell 1995; 83:1-4.)Tj
27.2636 58.5296 TD
-0.0001 Tc
0.017 Tw
[(7.)-661.8(Kastan MB, Lim DS. The many substrates and functions of)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tc
0 Tw
(ATM. Nat Rev Mol Cell Biol 2000; 1:179-86.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
0.0032 Tc
0.1217 Tw
[(8.)-658.5(Bakkenist CJ, K.astan MB. DNA damage activates ATM)]TJ
1.4117 -1.1948 TD
0 Tc
0.0418 Tw
(through intermolecular autophosphorylation and dimer dis-)Tj
T*
0 Tw
(sociation. Nature 2003; 421:499-506.)Tj
-1.4117 -1.4338 TD
(9.)Tj
1.4117 0 TD
0.0077 Tc
0.1172 Tw
(Nicholson KM, Anderson NG. The protein kinase B/Akt)Tj
0 -1.1948 TD
0.0381 Tc
0.0869 Tw
(signalling pathway in human malignancy. Cell Signal)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(2002; 14:381-95.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
0.0907 Tw
[(10.)-661.7(Downward J. Mechanisms and consequences of activation)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0.0188 Tc
0.1062 Tw
(of protein kinase B/Akt. Curr Opin Cell Biol 1998; 10:)Tj
T*
0 Tc
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(262-7.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
-0.0001 Tc
0.1127 Tw
[(11.)-661.8(Alessi DR, Andjelkovic M, Caudwell B, Cron P, Morrice)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0.0049 Tc
0.1201 Tw
(N, Cohen P, Hemmings BA. Mechanism of activation of)Tj
T*
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0.0872 Tw
(protein kinase B by insulin and IGF-1. Embo J 1996;)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(15:6541-51.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
-0.0001 Tc
0.0539 Tw
[(12.)-661.8(Brognard J, Clark AS, Ni Y, Dennis PA. Akt/protein kina-)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
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0.1158 Tw
(se B is constitutively active in non-small cell lung cancer)Tj
T*
0.0995 Tw
(cells and promotes cellular survival and resistance to che-)Tj
T*
0 Tw
(motherapy and radiation. Cancer Res 2001; 61:3986-97.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
0.1095 Tw
[(13.)-661.7(Chan TO, Tsichlis PN. PDK2: a complex tail in one Akt.)]TJ
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(Sci STKE 2001, E1.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
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[(14.)-661.2(Barlow C, Hirotsune S, Paylor R, et al. \(1996\) Atm-defi-)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0.0142 Tc
0.1108 Tw
(cient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia. Cell 86,)Tj
T*
0 Tc
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(159-71.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
0.0243 Tw
[(15.)-661.7(Cho H, Mu J, Kim JK, et al. Insulin resistance and a diabe-)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
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(tes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kina-)Tj
T*
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(se Akt2 \(PKB beta\). Science 22001; 92:1728-31.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
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[(16.)-661.7(Chen WS, Xu PZ, Gottlob K, et al. Growth retardation and)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
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(increased apoptosis in mice with homozygous disruption of)Tj
T*
0 Tw
(the Akt1 gene. Genes Dev 2001; 15:2203-8.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
-0.0001 Tc
0.0693 Tw
[(17.)-661.8(Westphal CH, Rowan S, Schmaltz C, Elson A, Fisher DE,)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0 Tc
0.0881 Tw
(Leder P. atm and p53 cooperate in apoptosis and suppres-)Tj
T*
(sion of tumorigenesis, but not in resistance to acute radia-)Tj
T*
0 Tw
(tion toxicity. Nat Genet 1997; 16:397-401.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
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[(18.)-661.8(Yang DQ, Kastan MB. Participation of ATM in insulin sig-)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0 Tc
0.0859 Tw
(nalling through phosphorylation of eIF-4E-binding protein)Tj
T*
0 Tw
(1. Nat Cell Biol 2000; 2:893-8.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
-0.0001 Tc
0.0179 Tw
[(19.)-661.8(Xu B, Kim ST, Lim DS, Kastan MB. Two molecularly dis-)]TJ
1.9117 -1.1948 TD
0.0012 Tc
0.1238 Tw
(tinct G\(2\)/M checkpoints are induced by ionizing irradia-)Tj
T*
0 Tc
0 Tw
(tion. Mol Cell Biol 2002; 22:1049-59.)Tj
-1.9117 -1.4338 TD
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[(20.)-661.7(Kandel ES, Skeen J, Majewski N, et al. Activation of Akt/)]TJ
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0.0784 Tw
[(Protein Kinase B Overcomes a G\(2\)/M Cell Cycle Check-)]TJ
T*
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0.1123 Tw
(point Induced by DNA Damage. Mol Cell Biol 2002; 22:)Tj
T*
0 Tw
(7831-7841.)Tj
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