Revista Española de Enfermedades Digestivas

Los oligonucleótidos antisentido y el diseño racional de nuevos fármacos antitumorales

Eficacia de la terapia génica antisentido utilizando oligonucleótidos anti K-ras y antitelomerasa en cáncer colorrectal

Aim: to test the efficacy of anti-k-ras and antitelomerase oligonucleotides for disabling colorectal cancer cell growth. Material and methods: an established human colorectal cancer cell line (SW 480, ATTC®) was used. Oligodeoxiribonucleotides (ODNs) have a phosphorotioate modification to ensure intracellular intake. We used an antitelomerase ODN (Telp5) and two anti-k-ras ODNs (AS-KRAS and ISIS). AS-KRAS is designed to join the k-ras oncogene's exon 1. ISIS links to the terminal transcription unit 5' of k-ras. Telp5 joins the template region of the hTR telomerase subunit. ODNs have been tested in different concentrations (1, 5, 10, 20 micromolar). Cell viability has been tested at 48 and 72 hours. Statistical analysis and graphic design were made with the statistical package "Analyzing Data with GraphPad Prism-1999", GraphPad Sofware Inc., San Diego CA©. We used the Student's t test for statistical analysis. Results: the lowest dose (1 µM) was not effective. Using the highest dose (20 mM for 48 hours) of combined AS-KRAS and Telp5 cell viability decreased to 99.67%. The rest of results varied depending on ODN type, dose, and exposure time. Conclusions: tested antisense ODNs stop colorectal cancer cell growth, and a combination of anti-telomerase and anti-k-ras is the most useful treatment. Efficacy is best with a higher dose and longer treatment period.

Objetivo: evaluar la eficacia de oligonucleótidos anti k-ras y antitelomerasa para detener el crecimiento tumoral en el cáncer colorrectal. Material y métodos: se ha empleado una línea celular establecida de cáncer colorrectal humano (SW 480, ATTC®). Los oligodesoxirribonucleótidos (ODN) utilizados en el presente trabajo presentan modificación fosforotioato con el fin de mejorar su estabilidad en presencia de fluidos biológicos. Hemos utilizado un ODN antitelomerasa (Telp5), y dos ODN anti k-ras (AS-KRAS e ISIS). AS-KRAS actúa en el exón 1 e ISIS actúa a nivel de la unidad terminal de transcripción 5' del oncogen k-ras. Telp5 se une a la subunidad hTR de la telomerasa. Se han aplicado en concentraciones 1, 5, 10 y 20 micromolar, midiendo la viabilidad celular a las 48 y 72 horas de tratamiento. El análisis estadístico y el diseño de los gráficos se han realizado mediante el programa "Analyzing Data with GraphPad Prism-1999". GraphPad Sofware Inc., San Diego CA©. Para el tratamiento estadístico se ha utilizado el test t de Student. Resultados: la dosis mínima (1 µM) no fue efectiva ni a 48 ni a 72 horas postratamiento. Con la dosis máxima (20 µM durante 48 horas) y utilizando la combinación de AS-KRAS y Telp5 obtuvimos una reducción de la viabilidad celular del 99,67%. El resto de resultados fueron intermedios, dependiendo del tipo de oligonucleótido empleado, la dosis y el tiempo de exposición. Conclusiones: los oligonucleótidos antisentido probados detienen el crecimiento celular en el cáncer colorrectal, siendo la respuesta más eficaz la combinación de ambos y aumentando dicha eficacia con mayor dosis y tiempo de exposición.

La respuesta inmune T1 inducida durante el tratamiento con PEG-IFNα mαs ribavirina controla la replicaciσn viral en pacientes con hepatitis crσnica C

Objectives: to analyze the T1/T2 cytokine profile in CD8 T cells from peripheral blood mononuclear cells from patients with genotype-1 CHC during treatment with pegylated interferon (Peg-IFN) α2a plus ribavirin (RBV). To correlate Th1/Th2 balance with virological response. Patients and methods: in this prospective longitudinal study, a total of 28 naïve genotype-1 CHC patients received Peg-IFNα2a (180 µg/week) plus RBV (1-1.2 g/day) for 48 weeks. All patients (mean age 45 ± 8 years) completed treatment and follow-up: 12 (43%) achieved a sustained virological response (SVR), 13 relapsed after end of treatment (47%), and only 3 (10%) were non-responders. Sixteen healthy controls were also analyzed (mean age 39 ± 17 years). The production of IL-4, IIFNγ, and TTNFα by CD8 T cells was measured by intracytoplasmic detection using flow cytometry in both resting and stimulated cells with a phorbol ester. Statistics: Student's t test for independent values, χ2 test, and ANOVA test were used; relapsers and non-responders were joined to achieve a higher statistical power. Results: at third month during treatment, phorbol ester-stimulated-IL-4 levels tend to be lower in patients who presented with SVR versus those who did not (0.97 vs 2.58; p = 0.1). No statistically significant differences were found in IIFNγ and TTNFα levels at month 3. At EOT, the stimulated-IIFNγ production was significantly higher in patients with SVR (20 vs. 8; p < 0.05). Conversely, IL-4 production was higher in NR patients although these data did not reach statistical significance (p < 0.1). No significant differences were found in TTNFα (14 vs. 7; p < 0.2). Conclusions: Cytokine T1 induced-response maintenance during combination treatment, measured as IIFNgamma production by CD8+ T lymphocytes, is associated with SVR and suggests the replication control and later clearance of patients infected by genotype-1 HCV.

Objetivos: analizar el perfil de citocinas T1/T2 producidas por los linfocitos T CD8+ de sangre periférica en pacientes con hepatitis crónica C (HCC) y genotipo 1 durante el tratamiento con interferón pegilado (Peg-IFN) α2a y ribavirina (RBV) y compararlos con controles sanos. Correlacionar el balance T1/T2 con la respuesta virológica al tratamiento combinado. Pacientes y métodos: en este estudio prospectivo longitudinal se incluyeron 28 pacientes naïve con HCC genotipo 1 tratados con Peg-IFNα2a (180 µg/semana) más RBV (1-1,2 g/día) durante 48 semanas. Los 28 pacientes (edad media 45 ± 8 años) finalizaron el tratamiento y seguimiento: 12 (43%) presentaron respuesta viral sostenida (RVS), 13 recidivaron (47%) y sólo 3 fueron no respondedores (10%). Se estudiaron 16 controles sanos (edad media de 39 ± 17 años). Se analizó mediante citometría de flujo la producción intracitoplásmica de IL-4, IFNγ y TNFα por los linfocitos T CD8+ en reposo y tras ser estimulados con un ιster de forbol. Anαlisis estadνstico: t de Student, test de χ2 y ANOVA; se agrupan los pacientes recidivantes y no respondedores para obtener mayor potencia estadística. Resultados: no se encontraron diferencias significativas entre los niveles de citocinas de controles sanos y pacientes con HCC. Al tercer mes de tratamiento, los niveles de IL-4 inducidos tendían a ser menores en los pacientes que obtuvieron una RVS que en el resto de pacientes (0,97 vs. 2,58; p = 0,1); tampoco se encontró significación estadística en relación a los niveles de IIFNγ y de TTNFα. Al final del tratamiento, la producciσn de IIFNγ estimulado fue significativamente mayor en los pacientes que obtuvieron una RVS (20 vs. 8; p < 0,05). Por el contrario, la producción de IL-4 fue mayor en los pacientes no respondedores, aunque estos datos no alcanzaron significación estadística (p < 0,1). No se encontraron diferencias en relación con los niveles de TTNFα (14 vs. 7; p < 0,2). Conclusiones: el mantenimiento de la respuesta inmune tipo T1 durante el tratamiento combinado, medida en función de la síntesis de IIFNγ por los linfocitos T CD8, se asocia con RVS y sugiere el control de la replicaciσn y el aclaramiento posterior de los pacientes infectados con el genotipo 1 del VHC.

Tratamiento secuencial para la proctalgia fugaz: Resultados a medio plazo

Introduction: proctalgia fugax (PF) is a benign, self-limiting disease characterized by episodes of intense anorectal pain at frequent intervals in the absence of organic proctological disease. Even though PF was described more than a century ago, its etiology remains unclear. Currently there is no information available. Few papers quoting many ways of management have been published. The aim of this study was to investigate patients complaining of this condition and to treat them with sequential therapy. Patients and methods: we devised a descriptive, prospective study of patients complaining of acute perianal pain -duration less than 30 minutes- without organic disease or previous perianal surgery since 1996 to 2002 in our Department. We treated these patients using a three-step treatment (1: information, hip bath, benzodiazepines; 2: sublingual nifedipine 10 mg, or topic 0.1% nitroglycerin on demand; 3: internal anal sphincterotomy if hypertrophy of the internal anal sphincter was demonstrated by anal ultrasonography and no improvement was confirmed with the previous steps of treatment). We defined remarkable improvement as a decrease in the number of episodes by half or in pain intensity by 50%. Results: Fifteen patients with an average follow-up of 4 years. Anal endosonography confirmed a grossly thickened internal anal sphincter (IAS) in 5 cases. After the first step of treatment 7 patients improved and 1 patient was cured; after the second step of treatment 3 patients improved and 1 was cured; the third step was applied to 3 patients with a thickened IAS; 1 patient improved and 1 patient was cured. Conclusion: a total resolution of PF is not always possible, but we may improve symptoms and their frequency. Almost 50% of patients in our series improved with the first step of treatment; 30% of our patients had IAS hypertrophy. Anal endosonography can help in the diagnosis of organic diseases or IAS hypertrophy, for which we can perform an internal anal sphyncter myectomy.

Introducción: la proctalgia fugaz (PF) es una patología benigna, autolimitada, caracterizada por dolor anorrectal intenso, a intervalos frecuentes, sin causa orgánica aparente. Su etiología no está clara, a pesar de ser conocida desde hace un siglo y existen pocos artículos publicados sobre esta patología, con escaso número de pacientes, aplicando tratamientos variados con mayor o menor fortuna. El propósito de este trabajo ha sido estudiar a una serie de pacientes aquejados de esta patología y aplicar a todos ellos un tratamiento de manera secuencial en dependencia de su respuesta al mismo. Material y métodos: realizamos un estudio descriptivo prospectivo de pacientes aquejados de dolor perianal brusco, < 30 min de duración, sin lesión orgánica concomitante ni intervención previa perianal desde 1996-2002 en nuestro Servicio, sometiéndoles a un tratamiento de manera secuencial, basado en 3 escalones terapéuticos (1. información, baños de asiento, tranquilizantes; 2. nifedipino 10 mg sublingual, o nitroglicerina tópica 0,1% en el momento de la crisis; y 3. esfinterotomía lateral interna si hipertrofia del esfínter anal interno y no mejoría con los otros escalones). Definimos mejoría significativa cuando se producía un importante distanciamiento de los episodios (disminución nº crisis a la mitad) y/o disminución del dolor en un 50%. Resultados: quince pacientes con un seguimiento medio de 4 años. Mediante ecografía endoanal se pudo demostrar la existencia de hipertrofia del esfínter anal interno (EAI) en 5 casos. Tras la aplicación del escalón 1 mejoraron 7 pacientes y curó 1 paciente; con el escalón 2 mejoraron 3 pacientes y 1 curó, y se aplicó el escalón 3 a 3 pacientes que presentaban hipertrofia del EAI mejorando 1 y curando otro paciente. Conclusión: la curación de la PF no siempre es factible, pero sí es posible aliviar los síntomas, así como su frecuencia. Casi el 50% de los pacientes de nuestra serie mejoró con el escalón 1 del tratamiento. Un tercio de nuestros pacientes presentaban hipertrofia del EAI. La ecografía endoanal ayudará tanto a descartar lesiones orgánicas concomitantes como a diagnosticar una hipertrofia del EAI, que se beneficiaría de una esfinterotomía lateral interna.

Hiperhomocisteinemia y mutaciones de la metilentetrahidrofolato reductasa 677C→T y 1298A→C en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal

Background: hyperhomocysteinemia has been recently described in patients with inflammatory bowel disease (IBD), that could be related to the increased risk for thrombosis that exists in this disease. The aim of this study was the assessment of hyperhomocysteinemia in patients with IBD and its relation among vitamin B12 and folate levels, and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) 677C→ T and 1298A→C mutations. Patients and methods: fifty two consecutive patients with IBD were studied (29 women and 23 men); age: mean (standard deviation 41.7 [11.9] years) and 186 controls with no difference in age and gender. Hyperhomocysteinemia was considered as homocysteine levels higher than mean plus two standard deviations of the control group (≥ 13 μmol/l). Results: patients had an elevated prevalence of hyperhomocysteinemia (17.3 vs. 3.7%; p = 0.002) and lower folate (7.6 [4.1] vs. 8.9 [3.7] ng/ml; p = 0.01) and B12 vitamin levels (499 [287] vs. 603 [231] pg/ml; p = 0.003). Homocysteinemia was higher (14.3 [5.8] vs. 9.1 [3.9] μmol/l; p = 0.006) in 6 patients (11.5%) that had suffered thromboembolism. Frequency of MTHFR 677C→T (13.5 vs. 11.3%; p = 0.66) and 1298A→C (7.8 vs. 7.0%; p = 0.76) mutations was not increased in patients. Odds ratio (OR) for IBD in hyperhomocysteinemic patient was 5.51, 95% confidence interval (CI), 1.81-16.76; p = 0.002). Hyperhomocysteinemia was negatively associated with feminine gender (OR 0.08, 95% CI 0.01-0.49; p = 0.006) and folate levels (OR 0.04, 95%CI: 0.007-0.20; p < 0.001). Conclusions: hyperhomocysteinemia is associated with IBD and low folate levels, and could be involved in development of thromboembolism. MTHFR 677C→T and 1298A→C mutations are not related with the disease.

Fundamento: recientemente se ha descrito la existencia de hiperhomocisteinemia en la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), que podría estar relacionada con el mayor riesgo de trombosis en esta enfermedad. El objetivo del estudio ha sido evaluar la hiperhomocisteinemia en los pacientes con EII y su relación con las concentraciones de vitamina B12 y folato séricos y con las mutaciones de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) 677C→T y 1298A→C. Pacientes y métodos: se estudiaron consecutivamente 52 pacientes con EII (29 mujeres y 23 varones; edad: media [desviación estándar] 41,7 [11,9] años) y 186 controles con edad y sexo similares. Se consideró hiperhomocisteinemia cuando los valores de homocisteína eran superiores a la media más dos desviaciones estándar del grupo control (≥ 13 mmol/l). Resultados: los pacientes presentaban una mayor prevalencia de hiperhomocisteinemia (17,3 frente a 3,7%; p = 0,002) y unos valores más bajos de folato (7,6 [4,1] frente a 8,9 [3,7] ng/ml; p = 0,01) y de vitamina B12 (499 [287] frente a 603 [231] pg/ml; p = 0,003). En 6 pacientes (11,5%) que habían padecido episodios tromboembólicos la homocisteinemia era más elevada (14,3 [5,8] frente a 9,1 [3,9] µmol/l; p = 0,006). La frecuencia de las mutaciones MTHFR 677C→T (13,5% frente a 11,3%; p = 0,66) y de la 1298A→C (7,8 frente a 7,0%; p=0,76) no fue mayor en los pacientes. La odds ratio (OR) de EII en los pacientes hiperhomocisteinémicos fue 5,51, intervalo de confianza [IC] del 95%: 1,81-16,76; (p = 0,002). La hiperhomocisteinemia se asoció negativamente con el sexo femenino (OR 0,08, IC del 95%, 0,01-0,49; p = 0,006) y con los valores de folato (OR 0,04,IC del 95%: 0,007-0,20; p < 0,001). Conclusiones: la hiperhomocisteinemia se asocia a la EII y a las concentraciones bajas de folato, y puede estar implicada en el desarrollo de tromboembolia. Las mutaciones MTHFR 677C→ T y 1298A→ C no se relacionan con la enfermedad.

Infección por Helicobacter pylori y apoptosis de las células epiteliales de la mucosa gástrica

Asociación de enfermedad de Whipple e infección por Giardia lamblia

Whipple'disease is mainly characterized by affecting the digestive system, although it can be a multisystemic process with different clinical symptoms. The bacillus causing the disease has been isolated and cultivated in 2000 and the genome sequence has been recently analyzed in 2003, which means new perspectives for its diagnosis and treatment. Giardiasis is an infestation caused by a protozoo and may cause a malabsorption syndrome or run in a subclinic way. The case of a middle-aged male is described, who after a three-year period of migratory arthralgias, showed weight loss, diarrheas and abdominal pain, being diagnosed of Giardiasis, and after the persistent symptoms and a number of studies, was diagnosed with Whipple disease. Nineteen cases of Giardia-Whipple coinfection have been described in the literature, but the reason of this association has not been found yet. The discussion on whether there is an alteration in the inmunitary system which facilitates infections or, the development of an infection lead to the other one, goes on.

La enfermedad de Whipple se caracteriza por afectar principalmente al aparato digestivo, aunque puede ser un proceso multisistémico con variadas manifestaciones clínicas. En el año 2000 se ha conseguido aislar y cultivar el bacilo causante y recientemente, en el 2003, se ha analizado la secuencia completa del genoma, lo que supone nuevas perspectivas para el diagnóstico y el tratamiento. La giardiasis es una infección originada por un protozoo que puede evolucionar de forma subclínica o dar lugar a un síndrome de malabsorción. Describimos el caso de un paciente varón de mediana edad, que tras un periodo de tres años de artralgias migratorias en articulaciones periféricas, presentó un cuadro de pérdida de peso, con aumento del número de deposiciones y molestias abdominales siendo diagnosticado de Giardiasis y ante la persistencia de los síntomas y la posterior realización de diferentes estudios, de enfermedad de Whipple. Están descritos en la literatura 19 casos de coinfección Giardia-Whipple, sin que en el momento actual esté aclarado el por qué de esta asociación. Se mantiene la discusión sobre si existe una alteración en el sistema inmunitario que facilite las infecciones o si, por otro lado, el desarrollo de una infección favorece el origen de la otra.

Hipertrofia degenerativa del esfínter anal interno: una causa poco conocida de proctalgia

Hepatopatía alcohólica

Tratamiento de la crioglobulinemia asociada al virus de la hepatitis C (VHC) con interferón a + ribavirina

Anisakis simplex sobre ulcus en paciente con Billroth II

Actinomicosis esofágica como causa de hemorragia digestiva alta

Quiste mulleriano parametrial derecho

Neumatosis intestinal masiva asociada a nutrición enteral por catéter de yeyunostomía

Perforación intestinal: complicación inusual de la tuberculosis entérica que simulaba enfermedad de Crohn