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Revista de Diagnóstico Biológico

versión impresa ISSN 0034-7973

Rev Diagn Biol v.51 n.1 Madrid ene.-mar. 2002

 

NOTA TÉCNICA

Comparación de la determinación de homocisteina total

en plasma o suero


A. Alba, J. Iborra, B. Monreal, J. Aznar, J. Aznar

Unidad de Bioquímica Especializada. Servicio de Biopatología. Hospital La Fe. Valencia. 


Palabras claves: Homocisteina; suero; plasma. 

Key words: Homocysteine; serum; plasma. 


Recibido: 13-VII-01 
Aceptado: 4-IX-01

Correspondencia: Amparo Alba Redondo. 
Unidad de Bioquímica Especializada. Hospital La Fe. 
Avda Campanar, 21. 
46009 Valencia. (España).


Introducción

La homocisteina es un intermediario en el metabolismo de la metionina. Concentraciones elevadas en plasma o suero son un factor independiente para enfermedades vasculares periféricas, trombosis venosas profundas, enfermedades coronarias y defectos en el tubo neural1. Estudios epidemiológicos han demostrado esta asociación positiva. Los posibles mecanismos aterogénicos pueden ser disfunciones endoteliales, efectos citotóxicos, disminuciones en la liberación de óxido nítrico, incremento de la producción de radicales libres de oxigeno, potenciación de la LDL oxidada, estimulación de la proliferación del músculo liso y alteración de la función plaquetar. Sin embargo, algunos investigadores han postulado que la homocisteina puede causar aterosclerosis dañando directamente el endotelio2. También se ha observado que la concentración en plasma de homocisteina aumenta en pacientes con deficiencia de cobalamina y/o folato, vitaminas que influyen en el desarrollo del sistema nervioso central, siendo importante como marcador de las mismas, para evitar las secuelas neurológicas o psiquiátricas (demencia de tipo Alzheimer, depresión, etc) que provocan3

Por estas razones, tiene mucha importancia la medida de forma precisa de la homocisteina bien en plasma o en suero, en las que se ha demostrado que los resultados se correlacionan bien4. Se han desarrollado varios métodos diferentes, como son el HPLC con preparación manual de las muestras, y los kits semi o totalmente automatizados como el inmunoensayo de fluorescencia polarizada, placas de ELISA y un kit de HPLC con detección electroquímica5

El estudio se centró en la comparación de la homocisteina en plasma y suero para ver si existe diferencias entre ambas muestras, debido a la comodidad a nivel del laboratorio de la utilización del suero para la mayoría de las pruebas. En nuestro trabajo se contó con el inmunoensayo de fluorescencia polarizada de Abbott IMx con su analizador de IMx® (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), lo cual permite el tratamiento de grandes muestras, dando resultados rápidamente y con un aparataje más sencillo que con el HPLC6.

Técnica

Se procesaron 75 muestras de pacientes procedentes de consultas externas del hospital, obtenidas por punción venosa con tubos Vacutainer®, que contenían 5.4 mg EDTA (k2) como anticoagulante (plasma) y en tubo seco Venoject II® (suero), ambos se enfriaron rápidamente en hielo, y en menos de una hora, se centrifugaron durante 10´ a 3000 rpm y 4º C. El plasma y el suero se separaron y se congelaron a ­20º C hasta su análisis. Se utilizó el analizador IMx® para ambas muestras con su respectivo kit de Abbott IMx, el cual es un método bastante exacto y estable para la medida de la homocisteina7. La técnica se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del fabricante. 

Los valores de referencia para nuestro laboratorio son de 5-15 µmol /dl. 

El tratamiento estadístico utilizado para analizar los datos fue no paramétrico, correlación de Pearson y t-pareada, valores de p <0.05 fueron considerados significativos. 

La resultados obtenidos del estudio se reflejan en la tabla 1, en donde se observa una correlación excelente entre ambas muestras, así como el valor de la media la cual es similar. 

 



Discusión 

Estudios realizados anteriormente demuestran que el tiempo transcurrido hasta la centrifugación de la muestra a temperatura ambiente aumenta la concentración de la homocisteina extraeritrocitaria hasta en un 10% si el plazo es de una hora, siendo este incremento mayor si se alarga el tiempo de espera, ello debido a la continua producción en los hematies; mientras que la conservación de la muestra en hielo hace este aumento insignificante8. En lo referente a la utilización de anticoagulantes, se han probado el ácido etilendiaminotetracético (EDTA), heparina y citrato sódico, siendo el EDTA quien dá los resultados similares al suero4. Lo recomendado en la literatura es utilizar plasma con EDTA y poner las muestras en hielo hasta su centrifugación. Recientes estudios sugieren que la temperatura no es tan decisiva si se utiliza como anticoagulante el fluoruro sódico, aunque da valores menores comparados con el plasma de EDTA 9,10 y que la homocisteina también se puede determinar en suero11

Debido al especial cuidado que requiere la medición de la homocisteina, se pueden producir incrementos artificiales si la manipulación no es correcta. Si la centrifugación se realiza tempranamente, antes de una hora, y a temperatura ambiente, el contacto con los hematies es minimo y la variación de la concentración también. Por esta razón, en teoría es mejor la utilización del plasma que suero, debido al tiempo de espera que requiere el coagulo para su formación, pero que se obvia al poner la muestra en hielo. 

En el presente estudio, al comparar el plasma con el suero, se demostró que la correlación existente entre ambas muestras es excelente (R=0.9909), lo cual nos da total confianza en la utilización del suero para la medición de la homocisteina, en sustitución del plasma.

 

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