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Oncología (Barcelona)

versión impresa ISSN 0378-4835

Oncología (Barc.) vol.27 no.8  ago. 2004

 

ORIGINALES

 

Expresión de CD44v6 en carcinomas escamosos de pulmón. Asociación con altas concentraciones de EGFR, proteína erbB2 y elevada proliferación celular

 

CD44v6 expression in lung squamous carcinoma. Association with elevated concentrations of EGFR, erbB2 protein and high cell proliferation

 

 

A. RuibalI; J. BarandelaI; V. PubulI; J. RodríguezII

IServicio de Medicina Nuclear Hospital Clínico. Complejo Hospitalario Universitario Santiago de Compostela
IIServicio de Cirugía Torácica Hospital Central de Asturias. Oviedo

Dirección para correspondencia

 

 


RESUMEN

PROPÓSITO: el CD44v6 es una isoforma variante del CD44 involucrada en la diseminación metastática de ciertos tumores. Nosotros hemos querido analizar su expresión en carcinomas escamosos de pulmón y correlacionarla con otros parámetros clínico-biológicos de utilidad clínica.
MATERIAL Y MÉTODO: el CD44v6 fue determinado mediante un EIA (Bender Diagnostics. Austria), cuyo dintel de positividad fue establecido en 5 ng/mg prot. En las membranas celulares determinamos, asimismo, las concentraciones del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y proteína erbB2. También se ha tenido presente el estadio clínico, grado histológico (GH), ploidía y fase de síntesis celular (FS).
RESULTADOS: en los carcinomas escamosos de pulmón, la positividad para el CD44v6 fue apreciada en 76 de los 95 casos (80%). Los tumores CD44v6 positivos presentaron mayores concentraciones de EGFR (p:0,007), proteína erbB2 (p:0,056) y valores globales de FS (p:0,011). Asimismo, cursaron más frecuentemente con FS + (>15,4%) (p:0,041).
CONCLUSIONES: los resultados anteriores nos inducen a las siguientes consideraciones: 1) la expresión de CD44v6 se observa en un alto porcentaje de los carcinomas escamosos de pulmón; 2) Su asociación con altas concentraciones de EGFR, proteína erbB2 y una proliferación celular elevada sugieren que pueda reflejar un peor comportamiento y evolución de estos tumores.

Palabras clave: CD44v6. Carcinoma escamoso de pulmón. EGFR. Proliferación.


SUMMARY

PURPOSE: CD44v6 is an adhesion molecule implicated in tumor invasion. We studied its expressión in squamous cell carcinomas and its correlation with other clinico-biological parameters.
MATERIAL AND METHODS: CD44v6 levels were measured in 95 cases of squamous lung carcinoma (SLC) using an enzyme immunoassay kit (EIA, Bender Diagnostics, Austria). Likewise, we determined the concentration of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and erbB2 oncoprotein on the cell surface. The clinical stage, histological grade, ploidy and phase of cellular synthesis (SP) were also taken into account.
RESULTS: The CD44v6 expression (>5 ng/mg prot.) was observed in 76 out of the 95 cases of SLC. The CD44v6-positive tumors showed higher concentrations of EGFR (p = 0.007) and erbB2 protein (p = 0.056), and greater SP global values ( p = 0.011) than the CD44v6-negative tumors. Positive tumors were more frequently SP+ (>15 %) (p = 0.041).
CONCLUSIONS: These results led us to the following conclusions: 1) The expression of CD44v6 in SLC is very frequent. 2) Its association with higher concentrations of EGFR and erbB2, as well as the greater cell proliferation suggests that it could reflect a poorer outcome. 3) Further studies are required to establish the clinical usefulness of CD44v6 expression in this subtype of lung tumors.

Key words: CD44v6. Squamous lung carcinoma. EGFR. ErbB2. Cell proliferation.


 

 

Introducción

El CD44 es una familia de moléculas involucradas en las interrelaciones célula-célula y célula-matriz extracelular. Existe una forma estándar (CD44s) y otras variantes (CD44v) consecuencia de modificaciones post-translacionales y splicing alternativos, muchas de las cuales se consideran marcadores de metástasis e indicadores pronósticos en determinados tumores.

La isoforma variante v6 (CD44v6) actúa como molécula de adhesión en los macrófagos y células similares, lo cual sugiere que su concentración sérica se pueda incrementar en situaciones no tumorales1. En el campo oncológico, su interés clínico varía según cual sea el tumor estudiado, habiéndose demostrado su valor pronóstico en los de cabeza y cuello2, diferenciados gástricos3, cérvix uterino4-5, linfomas no Hodgkin y leucemias mieloides6 y sarcomas de partes blandas7.

A nivel sérico su determinación puede ser de interés como indicador pronóstico en el cáncer gástrico tipo difuso8, colo-rectales9 y pancreáticos10. Asimismo, puede ser reflejo de un peor pronóstico y reducida respuesta a la hormono y quimioterapia en el cáncer de mama11.

A nivel del árbol respiratorio, se ha observado que la expresión de CD44 por el epitelio bronquial se incrementa tras el daño tisular y puede ser el exponente de la motilidad celular, dediferenciación o una adhesión alterada12 y lo mismo ocurre con las isoformas variantes13. Así, se puede constatar expresión del CD44v6 en el epitelio pulmonar normal ( preferentemente neumocitos tipo II) donde parece jugar un papel importante en el mantenimiento de la arquitectura tisular14. La postividad inmunohistoquímica es más frecuente en los tumores escamosos y bronquioalveolares15; en los tumores neuroendocrinos de pulmón se correlaciona inversamente con la agresividad16, mientras que en los microcíticos la positividad parece asociarse con la afectación ganglionar17, 18.

Nosotros, en este trabajo, hemos querido estudiar la expresión inmunológica del CD44v6 en los carcinomas escamosos de pulmón y correlacionarla con otros parámetros clínico-biológicos que ayudaran a comprender su interés fisiopatológico y posible utilidad práctica.

 

Material y métodos

El grupo estudio incluyó 95 muestras tisulares tumorales de otros tantos pacientes afectos de carcinoma escamosos de pulmón, sin tratamiento previo, de edades comprendidas entre 36 y 79 años (mediana 64), de los cuales 72 eran varones. Asimismo, en 38 casos obtuvimos una muestra de tejido pulmonar aparentemente normal. Tras su obtención en el quirófano y transporte en un contenedor frío, las muestras fueron separadas de sus componentes grasos y almacenadas en nitrógeno líquido hasta su utilización. Posteriormente, fueron pulverizadas con un microdesmembrador (OMNI 1000, Waterbury, CT. USA) a -70ºC y homogeneizadas en un potter de teflon -cristal en un buffer TRIS-CLH (TRIS 0,01 M, EDTA Na2 0,0015 M, 10% glycerol, 0,1% monothioglycerol, pH 7,4). Los homogeneizados fueron luego centrifugados a bajas revoluciones (800 g durante 10 minutos a 4º C) y el sobrenadante obtenido ultracentifugado a 100,000 g durante una hora a 4º C. El nuevo sobrenadante (citosol) y el precipitado (membranas) se utilizaron para los distintos análisis biológicos.

El CD44v6 fue determinado mediante un EIA (Bender Diagnostics. Austria). El límite inferior de sensibilidad se estableció en 0,13 ng/mL; los coeficientes de variación intraensayo para unos valores medios de 0,52 y 6,4 ng/mL fueron del 8,6% y 5,1% respectivamente. Los coeficientes de variación interensayo para unos valores medios de 3,47 y 9,2 ng/mL fueron del 9,3% y 8,4% respectivamente. El dintel de positividad fue establecido en 5 ng/mg prot19. Otros parámetros analizados en las membranas celulares fueron las concentraciones del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR, Radioligando, Viennalab. Austria) y proteína oncogénica erbB2 (enzimoinmunoanálisis (EIA). Dupont. EEUU). Los valores de los parámetros biológicos fueron expresados por mg de proteína determinada por el método de Bradford. También se ha tenido presente el estadio clínico, grado histológico (GH), ploidía y fase S (FS), determinadas estas dos últimas mediante citometría de flujo ( Becton Dickinson. Fascam. EEUU) en muestras en fresco. Como las concentraciones de los parámetros biológicos no siguieron una distribución gaussiana, hemos empleado el test de MannWhitney, así como el chi cuadrado (x2), con la corrección de Yates cuando fue necesaria, para la comparación de variables cualitativas. Los resultados han sido expresados mediante la mediana y el intervalo. Una diferencia se consideró estadística cuando el valor de p fue inferior a 0,05.

 

Resultados

En los carcinomas escamosos de pulmón, la positividad para el CD44v6 fue apreciada en 76 de los 95 casos (80%) y no difirió estadísticamente de la constatada en los tejidos pulmonares aparentemente normales de los mismos pacientes (33/38; 86,8%). Sin embargo, sí observamos diferencias significativas (p:0,0071) entre las concentraciones de CD44v6 obtenidas en los tumores (i: 3.6-1305; mediana 47,5) y el tejido normal (i: 5-100; mediana 31, ng/mg prot.).

Los tumores CD44v6 positivos presentaron, tal como se expone en la Tabla I, mayores concentraciones de EGFR (p:0,007), proteína erbB2 (p:0,056) y valores globales de FS (p:0,011). Asimismo, cursaron más frecuentemente con FS + (>15,4%, que representa la mediana obtenida en todo el grupo tumoral) (p:0,041).

 

Discusión

La utilidad clínica de la expresión de CD44v6 varía según el tumor que consideremos. Menos trabajos existen en relación con su comportamiento en los carcinoma pulmonares no microcíticos y por ello hemos querido estudiar, mediante un método inmunoenzimático, su concentración en las membranas celulares de muestras correspondientes a carcinomas escamosos. Usando como dintel de positividad una concentración de 5 ng/mg prot., similar al empleado en los carcinomas mamarios, pudimos apreciar expresión de la isoforma en el 80% de los casos, siendo superior a la obtenida en los adenocarcinomas pulmonares (57,6%; datos no mostrados) y parecida a la observada en los tejidos pulmonares normales de los pacientes con aquel subtipo histológico de pulmón. Nuestra positividad tumoral es similar a la descrita por otros grupos20, 21 y lo mismo ocurre con la observada en el tejido pulmonar aparentemente normal22. Aunque no constatamos diferencias en la expresión de CD44v6 entre tejido tumoral y normal, si pudimos apreciar mayores concentraciones de la isoforma en las muestras neoplásicas, lo cual sugiere un posible papel de aquella molécula en la transformación neoplásica.

Los carcinomas escamosos CD44v6 positivos mostraron mayores concentraciones de EGFR y proteína erbB2, y fueron, asimismo, más proliferativos (mayores valores de fase S).

La expresión de EGFR es mayor en los carcinomas escamosos (79%) que en los otros tipos histológicos y superior a la constatada en el tejido pulmonar normal23. No se correlaciona con otros parámetros clínicos, aunque se han descrito mayores concentraciones en los casos con afectación ganglionar24. Su valor como factor pronóstico no es unánimemente aceptado por todos los grupos25, si bien otros autores consideran que es un indicador de un peor pronóstico y respuesta a la terapia25-27. Merece destacarse que parece ser la fosforilación y no la sobreexpresión del receptor la que se asocia con un peor comportamiento en los carcinomas no microcíticos de pulmón28. Piyathilake y cols.29 observan que la localización del EGFR en el citoplasma, pero no en la membrana, sí se asociaba con un peor pronóstico en los carcinomas escamosos y ello puede ser explicado por la internalización del receptor tras su unión al ligando.

En relación con el oncogen erbB2, se sabe que el epitelio normal no suele expresarlo, pero sí el 19-27% de los tumores no microcíticos pulmonares, especialmente poco o moderadamente diferenciados. Su expresión es mayor en los adenocarcinomas que en escamosos y no parece ser factor pronóstico30, si bien otros grupos observan una relación con la afectación ganglionar y una tendencia a una menor supervivencia31, 32. La positividad para este oncogen y el EGFR parece definir un subgrupo de tumores con un peor comportamiento y evolución33. Asimismo, este gen se correlaciona con la densidad de microvasos34 y es responsable de la resistencia a ciertos fármacos35.

Los carcinomas escamosos son más proliferativos que los adenocarcinomas, lo cual puede explicar una mayor agresividad y una mejor respuesta al tratamiento36. Asimismo, la proliferación tiene interés pronóstico37-40, de tal manera que en los tumores no microcíticos una menor proliferación y una mayor apoptosis se asocia con una superior supervivencia41.

Los resultados anteriores nos inducen a las siguientes consideraciones: 1) es posible detectar la expresión de CD44v6 en un alto porcentaje de los carcinomas escamoso de pulmón, no difiriendo de la observada en muestras aparentemente normales de los mismos pacientes; 2) las concentraciones de CD44v6 son mayores en los tumores que en los tejidos aparentemente normales de los mismos pacientes; 3) la positividad para el CD44v6 no se correlacionó con ninguno de los parámetros clínicos habituales, pero sí con mayores concentraciones de EGFR y proteína erbB2, así como una mayor proliferación celular. Aunque ello podría reflejar su relación con un peor comportamiento y evolución, en el momento actual no podemos precisar como la expresión de esta isoforma puede influir en el seguimiento de este subtipo histológico pulmonar.

 

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Dirección para correspondencia
Dr. A. Ruibal Morell
Servicio de Medicina Nuclear
Hospital Clínico
Complejo Hospitalario Universitario
E-15706 Santiago de Compostela

Recibido: 01.06.04
Aceptado: 15.07.04

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