CARTAS AL EDITOR

BAX como factor de susceptibilidad en el cáncer colorrectal hereditario no polipósico

BAX as a suseptibility factor in hereditary non polyposis colorectal cancer

Palabras clave: Cáncer de colon hereditario no polipósico. Herencia. Juventud. Estudio genético. BAX. Bethesda. hMLH1. hMSH2.

Key words: Hereditary non polyposis colorectal cancer. Genetic inheritance. Youth. Genetic study. BAX. Bethesda. hMLH1. hMSH2.

Sr. Editor:

BAX pertenece a la familia de proteínas Bcl-2 y juega un papel clave en la regulación de la vía mitocondrial de la apoptosis en las células epiteliales (1,2). Con frecuencia aparece alterada en tumores con fenotipo MSI (inestabilidad de micro-satélites) (3). Los tumores con fenotipo MSI se caracterizan por la baja frecuencia con que se detectan mutaciones en el gen promotor de la apoptosis p53, en comparación con los Mss (estabilidad de micro-satélites), lo que permite especular con la posibilidad de que en los tumores MSI sea BAX, en lugar de p53 (el gen implicado en el paso de adenoma a carcinoma). La actividad pro-apoptótica de BAX parece estar en equilibrio con la actividad como factor de supervivencia ejercida por Bcl-2, por lo que se ha asumido que la alteración de uno solo de los alelos de BAX bastaría para desequilibrar la balanza hacia la proliferación celular (1,4). La pérdida de la región terminal del brazo largo del cromosoma 19, que contiene el gen BAX, se ha descrito en el cáncer colorrectal (CCR) (1-4). El objetivo del estudio es comprobar si la pérdida somática de la región cromosómica 19q13.1-13.4, que condiciona la falta de expresión de BAX, es un suceso frecuente en el CCR.

Se seleccionan 44 CCR diagnosticados antes de cumplir los 51 años. La extracción de ADN se realizó de sangre periférica (línea germinal) y de tejido tumoral (línea tumoral). Se determinó la presencia de mutaciones germinales en todos los exones de los genes hMLH1 y hMSH2 mediante la técnica de electroforesis en geles con gradiente desnaturalizante. Para establecer la existencia y el grado de inestabilidad de las secuencias repetitivas en el ADN, se utilizaron los criterios recomendados por la "internacional guidelines for evaluation of MSI in colorectal cancer", que establece el fenotipo de MSI aplicando el criterio de 5 microsatélites. Para analizar la pérdida de esta región cromosómica 19q13.1-13 del cromosoma 19 se utilizaron secuencias polimórficas de naturaleza microsatélite (D19S112, D19S223, D19S425, ErCC1 y el triplete de DMPK), y polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) localizados en las posiciones 8092 y 8106 del gen ERCC1 (número de acceso GenBank M63796). Para ello, se seleccionaron áreas de la pieza tumoral que mostraban una mínima infiltración de estroma y de células inflamatorias, pues el tejido sano puede enmascarar las posibles pérdidas surgidas en las células cancerosas. La pérdida de la región cromosómica 19q13.1-13.4 se analizó mediante la comparación de los patrones de alelos, en las líneas tumorales y germinales, de secuencias polimórficas situadas en la misma. Estadística: test de la χ² cuando fue posible y el test exacto de Fisher en el resto de casos.

De los 44 casos analizados, en 30 de ellos se obtuvo la información necesaria para analizar la pérdida cromosómica. De estos, 17 (57%) fueron portadores de deleción en el ADN procedente del tumor. No hay diferencias en la frecuencia con que se produjo la pérdida de uno u otro alelo en los SNP. De los 12 casos en que la deleción se detectó mediante el SNP8092, en 6 ocasiones se perdió el alelo con el nucleótido adenina (A) y en otras tantas el alelo con la citosina (C). En las 2 deleciones detectadas con el SNP8106 se perdió el fragmento que portaba la adenina, siendo en estos dos casos el SNP8092 no informativo. En función del fenotipo, entre los 25 tejidos Mss resultaron informativos 24, en 12 de los cuales (50%) se confirmó la deleción de la región cromosómica analizada. En los tejidos MSI (n = 19) fueron informativos 6 casos, indicando la existencia de deleción en 5 de ellos (83%).

La inactivación del gen promotor de la apoptosis p53 se considera clave en el proceso de malignización tumoral. Dentro de los CCR, la frecuencia con que aparece mutado este gen es un rasgo diferencial entre los tumores con fenotipo Mss (50% presentan la mutación) y MSI (< 30%) (5,6). La expresión de BAX está inducida por la acción de p53, estimándose que aproximadamente la mitad de las acciones desencadenadas por p53 durante la apoptosis requieren la mediación de BAX (7). La elevada frecuencia con que se identifican mutaciones inactivadoras del gen BAX en los CCR con fenotipo MSI, ha permitido especular con la posibilidad de que en este tipo de tumores sea la inactivación del gen BAX el suceso que marque la evolución de adenoma a carcinoma.

En el estudio de la pérdida de fragmentos cromosómicos mediante el análisis de secuencias microsatélite polimórficas, debe tenerse en cuenta la presencia de tejido normal, entremezclado con el tejido tumoral. Esto resulta especialmente cierto en el CCR, dada la elevada infiltración linfocitaria que caracteriza a este tipo de tumores. Además, si como se acepta de forma generalizada, las pérdidas cromosómicas son sucesos que ocurren en una fase avanzada del desarrollo tumoral, no todas las células presentes en un tumor primario habrán perdido el fragmento que se analiza. En el caso de los tejidos MSI, el análisis de secuencias microsatélite amplificadas por PCR, resulta un método "conflictivo" a la hora de identificar la pérdida de regiones cromosómicas, ya que la aparición de "nuevos" alelos en el tejido tumoral, fruto de la inestabilidad, dificulta la interpretación de los resultados. Es por esto que, para identificar la deleción en los tejidos MSI, sólo se han tenido en cuenta los resultados obtenidos con los SNP.

Seis de los casos analizados con tumores clasificados como MSI, fueron informativos para los SNP utilizados. El 83% (n = 5) mostraron pérdida de esta región cromosómica en el tejido tumoral. Hay que destacar que el único caso en el que no fue posible identificar la deleción, el tejido se obtuvo en fresco y, por tanto, la selección de la región a analizar no pudo ser tan estricta como en los tejidos parafinados. El análisis de microsatélites en estos tejidos inestables demostró la pérdida prácticamente total de alguno de los alelos observados en la línea germinal en muchos de ellos. Estas desapariciones son, en general, difícilmente explicables como una consecuencia de la inestabilidad genética, ya que supondrían un sesgo evidente en la selección de determinados alelos durante la proliferación clonal. En algunos tejidos MSI el estudio de regiones tumorales que presentaban una mayor densidad celular, demostró la existencia de un patrón heterogéneo en la distribución de los alelos de las secuencias microsatélites en la masa tumoral. Aceptando que las regiones tumorales más densamente pobladas representan áreas de una más rápida proliferación celular, los resultados aquí obtenidos indicarían que la deleción de esta región cromosómica tiene un alto valor adaptativo, y la célula alterada en la que se produce adquiere algún tipo de ventaja selectiva que le permite entrar en una fase de expansión clonal.

En los tejidos Mss, el análisis combinado de los microsatélites y los SNP permitió obtener información de la región próxima al gen BAX en 24 de ellos, donde el 50% (n = 12) presentó pérdida de esta región cromosómica en los tejidos tumorales.

Debido a la mala calidad del ADN extraído de las piezas parafinadas, no ha sido posible establecer claramente los límites de la región mínima delecionada, aunque con los datos que actualmente poseemos se puede afirmar que en ella se incluyen los loci correspondientes a D19S425 y al gen BAX, lo que supone entre 2 y 3 megabases de ADN genómico. Son varios los genes que se localizan en este fragmento de ADN y por tanto, posibles dianas de la deleción identificada. Sin embargo, BAX reúne las características necesarias para ser considerado un gen supresor de tumores (6,8). En los tumores MSI, este gen aparece muy frecuentemente alterado en una serie de 8 guaninas localizadas en el exón 3, pero también se han identificado otros tipos de mutaciones que alteran de forma puntual la secuencia del mismo en tumores y líneas tumorales con fenotipos MSI y Mss (9). Sería necesario aumentar la serie en número de casos para confirmar todos estos hallazgos encontrados.

En conclusión, la deleción de la región cromosómica 19q13.1-13.4 es frecuente en el CCR, especialmente en aquellos con fenotipo de inestabilidad de microsatélites. La deleción sucede, aparentemente, en una fase avanzada del tumor y tendría como consecuencia la entrada de las células en una fase expansiva de crecimiento clonal. Esta deleción podría ser la causa de la reducción en la expresión del gen BAX observada en el CCR, independientemente de que sean MSI o Mss. Por otra parte, el hecho de que el alelo de BAX conservado en el tumor sea portador de mutaciones en un dominio fundamental para la actividad de la proteína, sería una prueba de la importancia que la inactivación de este gen tiene en la evolución del CCR.

Antonio Ríos^1-3, José Manuel Rodríguez^1-3, Pablo Carbonel⁴ y Pascual Parrilla^1-3
1 Departamento de Cirugía. Universidad de Murcia. Murcia.
² Servicio de Cirugía General y de Aparato Digestivo.
Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca.
El Palmar, Murcia. Servicio Murciano de Salud. Murcia.
³ Instituto Murciano de Investigación Bio-Sanitaria
Virgen de la Arrixaca (IMIB-Arrixaca). Murcia.
⁴ Departamento de Genética y Microbiología. Hospital
Universitario Virgen de la Arrixaca. El Palmar, Murcia.
Servicio Murciano de Salud. Murcia

Bibliografía

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