INTRODUCCIÓN

El consumo de drogas constituye un grave problema a nivel mundial con importantes repercusiones en el ámbito de la salud. El medio militar no es ajeno a este problema, siendo de especial importancia porque sus cometidos están relacionados con actividades de riesgo.

Los laboratorios situados en establecimientos farmacéuticos son los encargados de la realización del análisis preliminar de cribado de muestras, como lo marca la Instrucción Técnica 1/2012 de la Inspección General de Sanidad (IGESAN). Siendo confirmados los resultados positivos de estos, en el Instituto de Toxicología de la Defensa (ITOXDEF). Las muestras cuyos resultados sean positivos a drogas de abuso se conservaran a -20 °C, durante seis meses (excepto Orden Judicial o expediente disciplinario en curso) por si se requiere repetir la determinación¹.

El cannabis y la cocaína son las drogas ilegales con una mayor prevalencia de consumo. Los metabolitos de cannabis y cocaína pueden ser detectados en orina tras su consumo, pero éstos pueden deteriorarse durante su almacenamiento y conservación, debido a numerosos factores como puede ser el pH de la orina, tipo de material del contenedor en el que se deposita la orina, temperatura, etc.^2-5, obteniendo resultados distintos si reanalizamos la muestra.

Así, es importante para el laboratorio conocer la estabilidad de los metabolitos presentes en dichas muestras por si fuese necesario volver a analizarlas.

Estudiar la estabilidad de los metabolitos del cannabis y cocaína en orina, después de haber sido conservadas a -20 °C durante más de un año.

MATERIAL Y MÉTODOS

En el Servicio Farmacéutico de San Fernando encuadrado en Jefatura de Sanidad Bahía de Cádiz dependiente de Armada, se procesaron noventa y una muestras de orina procedentes de militares, que resultaron positivas a metabolitos de cannabis y cocaína (sesenta y cinco a metabolitos de cannabis, veinticinco a metabolitos de cocaína y una a cannabis y cocaína), utilizando el analizador Cobas Integra 400 plus^® de Roche, previamente calibrado y utilizando controles positivos y negativos según instrucciones del fabricante antes de realizar el análisis de las orinas a estudiar, para la detección cualitativa-semicuantitativa de cannabinoides y el metabolito de la cocaína, benzoilecgonina. El analizador utiliza un método basado en la interacción cinética de micropartículas en solución (KIMS), medida a través de los cambios producidos en la transmisión de la luz (en una muestra exenta de drogas de abuso, las micropartículas fijadas a anticuerpos se unen a los conjugados solubles de la droga, induciendo la formación de agregados de partículas. Dado que la reacción de agregación continúa produciéndose en ausencia de droga en la muestra, la absorbancia aumenta. En una muestra que contiene la droga a determinar, esta compite con el derivado de la droga unido a partículas por los anticuerpos libres. Los anticuerpos unidos a drogas dejan de estar disponibles para inducir la agregación de partículas, inhibiéndose, la formación de retículos de partículas. La presencia de droga en la muestra disminuye la absorbancia). El contenido de droga de la muestra se determina en relación al valor obtenido para una concentración conocida de la droga.

Se utilizó como punto de corte 50 ng/ml para cannabinoides y 300 ng/ml para metabolitos de cocaína. Considerando un resultado preliminar positivo si el resultado obtenido era igual o superior al punto de corte y negativo si era inferior a este. Todos los resultados presuntamente positivos fueron enviados al Laboratorio de referencia (ITOXDEF), que al realizar la analítica por el método de Cromatografía de Gases / Espectroscopia de Masas fueron confirmados como positivos.

Las noventa y una muestras de orina que habían dado positivas, fueron conservadas congeladas en tubos de plástico a -20 °C durante un periodo de tiempo superior a doce meses (media 16 meses). Tras descongelar y agitar suavemente para homogeneizar, se reanalizaron con el mismo analizador Cobas Integra 400 plus^®.

Para el procesado de las muestras de orina fueron codificadas de forma numérica para preservar la privacidad de su origen, se ha mantenido en todo momento la anonimidad y privacidad del personal del cual provenían de acuerdo a la Ley Orgánica de Protección de Datos 15/1999.

RESULTADOS

Las concentraciones de los metabolitos de cannabis y cocaína en las muestras de orina antes (concentración inicial) y después de haber sido congeladas (concentración final) se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1 Concentraciones iniciales y finales del metabolito. 

ds: desviación estándar.

En la mayoría de las muestras (89,4% que presentaban cannabis y 77% para las de cocaína) se observó una disminución en la concentración tras el almacenamiento a -20 °C. Aunque en un menor porcentaje (9% de las muestras con cannabis y 23% de las de cocaína) se pudo observar un aumento en la concentración. En una muestra (1,5% que presentaba cannabis) no varió la concentración (Tabla 2).

Esta variabilidad ya ha sido descrita por algunos autores^6,7. En el estudio de Dugan y colaboradores afirman que no es posible predecir con un alto grado de fiabilidad, un aumento o disminución después de la congelación, en su trabajo las orinas estudiadas para benzoilecgonina, 32 presentaron aumento del metabolito post-congelación respecto a 17 que disminuían y para metabolitos de cannabis las muestras que aumentaron su concentración tras el almacenamiento fueron de 17, disminuían 27 y 4 permanecieron invariables.

En nuestra serie de sesenta y seis muestras positivas a cannabis se produjo una disminución media respecto a los valores iniciales de -22,89% (rango +43,15% a -73,36%); (IC95%: -27,46 a -18,31).

De las veintiséis muestras positivas a metabolitos de cocaína se produjo una disminución media respecto a los valores iníciales de -4,02% (rango de +7,03 a -49,01), (IC95%: -8,12 a +0,07).

En aquellas muestras que disminuían su concentración post-congelación, en siete muestras de orina con metabolitos de cannabis el valor estaba por debajo del cut-off cuando volvió a medirse y en cincuenta y dos por encima. En el caso de las muestras con metabolitos de cocaína en dos muestras estaba por debajo del cut-off y dieciocho por encima de dicho punto de corte.

A las series de resultados obtenidos antes y después de su almacenamiento se aplicó la prueba de Wilcoxon, prueba no paramétrica, ya que los valores seguían una distribución asimétrica para lo que se usó el programa SPSS v.18, mostrándonos que existían diferencias significativas en la disminución tras la congelación, con una p<0,001 para los metabolitos del cannabis y para el metabolito de cocaína p=0,016.

DISCUSIÓN

El estudio presenta como limitación la alta incertidumbre que acompaña al método semicuantitativo empleado en las mediciones, pero al no disponer de otro método, es el que usamos para orientar de forma aproximada como varía la concentración. Se observó que los metabolitos del cannabis presentes en las orinas congeladas por más de un año, disminuían en mayor medida que los de la cocaína (-22,89% frente a -4,02%). El mayor porcentaje de pérdida para los derivados del cannabis frente al de cocaína podría explicarse por los procesos de adsorción de estos al material plástico, como ya ha sido observado con anterioridad en otros estudios como el de Asbjorg⁴. En dicho estudio, donde la muestra era sangre conteniendo metabolitos de cannabis y almacenada en envases de vidrio y de plástico, se observó que en estos últimos se perdió un tanto por ciento importante del metabolito del cannabis, tetrahidrocannabinol, permaneciendo invariable en los viales de vidrio a igualdad de tiempo almacenado.

Para el caso del cannabis, si comparamos con otros autores^6,7, encontramos de forma parecida que aproximadamente un 40% de las muestras presentan una disminución en el rango de 0 a -25%. Siendo el rango más común de variación en nuestra serie el intervalo de -10% a -40% (43 de 66), lo que supone un 65,15% de las muestras (Tabla 3).

Tabla 3 Cambios en la concentración de los metabolitos de Drogas de abuso en orina tras la congelación a -20 °C. 

En el caso del metabolito de la cocaína, benzoilecgonina, el intervalo de -10% a +10%, es donde se concentra el cambio en la concentración en el mayor número de muestras (23 de 26), lo que su pone un 88% (Tabla 3). Este último resultado difiere de los presentados por otros autores como Dugan and Bogeman⁷, que señalan un porcentaje de aproximadamente 73% (36 de 49) con un cambio en la concentración en el intervalo de -25% a 25% (16 de -25% a 0% y 20 de +1 a +25%).

CONCLUSIONES

Se concluye, que en el supuesto de tener que repetir un análisis después de haber sido congelado un periodo de tiempo superior a un año, habría que considerar la posible pérdida de metabolitos en el cannabis, no siendo tan importante dicha pérdida para los metabolitos de la cocaína.