Introducción
La producción agropecuaria tiene unos profundos efectos en el medio ambiente en conjunto. Son la principal fuente de contaminación del agua por nitratos, fosfatos y plaguicidas. La agricultura afecta también a la base de su propio futuro a través de la degradación de la tierra, la salinización, el exceso de extracción de agua y la reducción de la diversidad genética agropecuaria. Sin embargo, las consecuencias a largo plazo de estos procesos son difíciles de cuantificar en el agua, suelo y medio ambiente1.
En Colombia se han realizado esfuerzos con el objetivo de solucionar la problemática por el uso indiscriminado de agroquímicos en las actividades agrícolas, los plaguicidas que se usan en el país, alrededor de 40.000 toneladas de pesticidas por año, tendiendo a aumentar, a través de 1.500 formulaciones registradas en el Ministerio de Salud. El uso de los agroquímicos por parte de las comunidades rurales se realiza sin normas claras de bioseguridad, esto genera altos niveles de casos por contaminación por el manejo inadecuado de productos químicos, en el año 2007 se reportaron las mayores intoxicaciones por pesticidas en Norte de Santander de los últimos diez años2.
La fresa se destaca entre otras cosas por su contenido de vitamina C, taninos, flavonoides, antocianinas, catequina, quercetina, kaempferol y ácidos orgánicos (cítrico, málico, oxálico) ayudan a disminuir el riesgo de eventos cardiovasculares, mejoran la función endotelial vascular y disminuyen la trombosis3.
Los productores de fresas no cuentan con capacitaciones que les permitan conocer y poner en práctica el adecuado manejo del cultivo, esto conlleva a que se obtengan producciones con límites de pesticidas desconocidos y al no disponer de agua de calidad para los cultivos se obtienen fresas contaminadas que provocan enfermedades transmitidas por alimentos (ETAS)4.
Dentro los numerosos patógenos que causan enfermedades en la fruta, se encuentra el hongo causante del moho gris (Botrytis cinerea)5. Otra enfermedad común es viruela causada por el hongo Ramularia tulasnei Fuckel. teleomorfo de Mycosphaerella fragarie (Tul.) Lindau la cual produce una reducción del crecimiento total y bajas en la producción mientras que la antracnosis causada por Colletotrichum spp. causa lesiones en hojas y tallos pudiendo también momificar las flores y frutos tiernos6.
Xanthomonas fragariae es el agente causal de la enfermedad bacteriana mancha angular de la hoja de la fresa. Se trata de una enfermedad prevalente principalmente en América del Norte; sin embargo, posteriormente se ha registrado en numerosas zonas de cultivo de fresa en todo el mundo, con inclusión de América del Sur7.
Los Microorganismos Eficientes (ME) son una combinación de microorganismos beneficiosos de cuatro grupos principales: bacterias fototróficas, levaduras, bacterias productoras de ácido láctico y hongos de fermentación que secretan substancias beneficiosas como vitaminas, ácidos orgánicos, minerales quelatados y fundamentalmente substancias antioxidantes (BID, 2009)8, mientras que los Microorganismos de Montaña (MM) se podrían catalogar como un tipo de ME, o sea, un consorcio que contienen bacterias fotosintéticas, bacterias productoras de ácido láctico, actinomicetes, hongos filamentosos y levaduras con posibilidades para el control de enfermedades de las plantas (Castro, Murillo, Uribe, Mata, 2015)9.
Por tales razones se hace necesario la búsqueda de alternativas más amigables con el medio ambiente y con menos riesgos para la salud de los consumidores. De ahí la importancia de comprobar la eficacia de los biopreparados arsenales que se producen localmente por la Asociación de Productores Agropecuarios (ASPAGRO) de Pamplona como alternativa local al uso irracional de los plaguicidas. El trabajo tuvo como objetivo determinar la eficacia de seis biopreparados locales para el control de las enfermedades foliares del cultivo de la fresa.
Metodología
La investigación se desarrolló en la en el periodo comprendido de marzo a diciembre de 2017. Se realizó el experimento en la finca Camacho de la Vereda Cariongo desde marzo de 2017 hasta agosto de 2017.
Se escogió en una plantación de fresa de 18 meses con fuente de inoculo natural de agentes patógenos en campos aledaños. Se realizó una prospección y diagnostico inicial de las enfermedades foliares presentes. Las muestras fueron analizadas en el laboratorio de Fitopatología de la Universidad de Pamplona.
Para el control de enfermedades foliares inicialmente se realizó un saneamiento a todas parcelas del experimento y se aplicó materia orgánica gallinaza a 400 kg/ha.
Se evaluaron nueve tratamientos:
1.Testigo saneado, 2 P1, 3 P2, 4 ME., 5 Caldo Rizósfera, 6 B. Meconio, 7 M6 Sol Vida, 8 Dythane (T. Químico) y 9 Testigo sin Sanear.
A continuación, se relacionan los ingredientes de los seis biopreparados y tipo de fermentación. (Tabla 1)
Las dosis a usar para los biopreparados fueron del 5 % (1L/20L), con excepción del biopreparado B. meconio que se aplicó al 1 % 200 mL/20L. Se realizaron los tratamientos semanalmente con una asperjadora manual de espalda con una solucion final de 400 L/ha. Las aplicaciones del fungicida Dithane PH80 tambien se realizaron semanalmente a una dosis 2,5 kg/ha
Se dispusieron los tratamientos en un diseño bloques al azar con arreglo 9 x 4 (9 tratamientos con 4 repeticiones), o sea, 36 unidades experimentales (parcelas). Cada parcela contó con 4 surcos de 5 metros de largo.
La evaluación de los síntomas de las enfermedades se realizó cada 15 días, tres días después de los tratamientos pares. Se evaluarán la 20 planta/parcelas cada 7 días en los surcos centrales, tres días después de cada tratamiento.
Se valuaron las enfermedades más importantes: antracnosis- (Colletotricum spp.), peca por Ramularia tulasnei, Botrytis cinérea y mancha por Xanthomonas fragariae. Para el caso de antracnosis se evaluaron hojas, flores y frutos, para Botritys cinérea los frutos y para la mancha por Ramularia y la mancha bacteriana, el follaje.
En cada parcela o unidad experimental se determinó el porcentaje de incidencia (plantas y órganos) y severidad para el follaje de la forma explicada anteriormente.
Al final del experimento se determinó el Área Bajo la Curva de Progreso de la Enfermedad (ABCPE) de cada parcela según el método de Campbell y Madden10, para lo cual se utilizó la siguiente formula:
Se realizó un análisis de varianza para las variables de incidencia, severidad y ABCPE. Se comprobó previamente de supuesto de normalidad, por la prueba de kolmodorov Smirnov. Se compararon las medidas por la prueba de Tukey con una probabilidad de error de p≤0,05). Para estos análisis estadísticos se empleó el paquete estadístico SPSS.
Resultados
Al analizar el ANOVA referente a la mancha por Ramularia tulasnei en las hojas de fresa se pudo observar que en el cuarto muestreo los valores de incidencia y severidad fueron menores desde el punto de vista estadístico para el biopreparado ME y los mayores para el Testigo sin sanear, el resto de los tratamientos quedaron intermedios desde el punto de vista estadístico entre estos mencionados. En el sexto muestreo los mayores niveles de incidencia se observaron en el tratamiento P1 y el Testigo sin sanear y el menor en ME y para la severidad también el menor valor correspondió a ME (aunque el tratamiento con Caldo Rizósfera no se diferenció de este) y los mayores para P1, P2, B meconio y M6 y el Testigo sin sanear. El resto de los tratamientos quedaron intermedios desde el punto de vista estadístico a los mencionados con mayor y menores valores (Tabla 2).
En el octavo muestreo la incidencia de la mancha por Ramularia en el Testigo sin sanear fue superior al resto de los tratamientos que no difirieron entre sí, sin embargo, la severidad fue menor en el tratamiento con ME y la mayor en el Testigo sin sanear, mientras que el resto de los tratamientos quedaron intermedios entre estos dos. En general dentro los bioproductos el de mejor respuesta fue ME e hicieron poco efecto P1 y P2.
El área bajo la curva del progreso de la incidencia de la peca fue menor para los tratamientos ME y Caldo Rizósfera y el mayor fue el Testigo sin sanear que no presentó diferencia estadística con los tratamientos P1, P2, B. meconio, Testigo saneado, M6 y Dithane, aunque estos tres últimos no se diferenciaron del B. meconio. Y para las severidades el tratamiento más bajo se presentó en ME y más alto en el Tratamiento sin sanear,
En el cuarto muestreo la incidencia de la antracnosis en hojas fue menor para el tratamiento con Caldo Rizósfera (46%) y mayor para el Testigo sin sanear (56%), el resto de los tratamientos quedaron intermedios entre estos, mientras que la severidad fue mayor para el testigo sin sanear (21%) y la menor para ME) (13%), aunque otros tres tratamientos no difirieron de este (químico, Caldo Rizósfera y B meconio) (Tabla 3).
En el sexto muestreo la incidencia de la antracnosis en hojas fue menor para el tratamiento con ME (45%) mayor para el Testigo sin sanear (61,25%), el resto de los tratamientos quedaron intermedios entre estos, aunque Caldo Rizósfera no se diferenció de ME y si del testigo sin sanear el resto de los tratamientos no se diferenciaron del testigo sin sanear. En ese momento la severidad fue mayor para el testigo sin sanear (26%) y la menor para ME, Dithane, aunque otros dos tratamientos no difirieron de este (químico y Testigo saneado con 19 % de severidad).
En el octavo muestreo no se observó diferencia en cuanto a la incidencia de la enfermedad que no hubo diferencia estadística entre los tratamientos y la severidad que presentaron menor severidad fue ME, Caldo Rizosfera, P1 y Dithane sin diferencia estadística entre ellos y mayor para el testigo sin sanear.
El área bajo la curva del progreso de la intensidad de la enfermedad fue menor para los tratamientos Caldo Rizosfera, ME, P2 y Dithane que no se diferenciaron entre sí y los de mayor M6, el Testigo sin sanear y Testigo saneado que no se diferenciaron entre sí, mientras que el resto de los tratamientos quedaron intermedios entre éstos. Las severidades más bajas las presentaron los tratamientos ME Y Caldo Rizósfera y la más alta para EL Testigo sin sanear
En el octavo muestreo la incidencia de la antracnosis en hojas no presentó diferencia entre los tratamientos oscilando entre 47 y 50% reflejando poca influencia de los tratamientos en esta variable. En ese momento la severidad fue mayor para el testigo sin sanear (29%) y la menor para ME (22%) y Caldo Rizósfera (22%), aunque otros dos tratamientos no difirieron de este último y si del testigo sin sanear (químico y Testigo saneado). La diferencia entre el tratamiento sin sanear y el tratamiento ME y Caldo Rizósfera podría explicarse en la eficiencia que tienen estos microorganismos en el mejoramiento del suelo y por la reducción del inóculo en los tratamientos con biopreparados y no en el Testigo sin sanear
Al analizar el ANOVA de la incidencia de la antracnosis en los frutos para los diferentes tratamientos se observó que en el cuarto muestreo en el tratamiento Testigo sin sanear la incidencia fue mayor con diferencia estadística con el resto de los tratamientos, en el sexto muestreo también el Testigo sin sanear presentó los mayores valores de incidencia y los menores el Testigo saneado y el tratamiento químico y el biopreparado M6 no se diferenciaron de este (el resto de los tratamientos no se diferenciaron de estos , pero si del Testigo sin sanear) (Tabla 4).
En el octavo muestreo de nuevo el Testigo sin sanear presentó los mayores valores de incidencia y los menores el Testigo saneado, pero el tratamiento químico y el biopreparado M6 no se diferenciaron de este (el resto de los tratamientos no se diferenciaron de M6 y Testigo saneado, pero si del Testigo sin sanear).
El área bajo la curva del progreso de la incidencia de la enfermedad fue mayor para el tratamiento T. sin sanear que se diferenció del resto de los tratamientos. Esto ratifica que, aunque los tratamientos se diferenciaron del testigo sin sanear no tuvieron una gran eficacia ya que los niveles de la enfermedad al final del experimento tuvieron una incidencia entre 56 y 63 % lo que provocó una pérdida notable de los frutos.
En el cuarto muestreo se puso de manifiesto que el testigo sin sanear presentó diferencia estadística del resto de los tratamientos mostrando la incidencia más alta del 67 %, al igual que en la semana seis y ocho. El el testigo químico con Dithane presentó diferencia estadística con el testigo sin sanear en las semanas de muestreo seis y ocho, aunque no hubo diferencia con el resto de los tratamientos (Tabla 5).
Este resultado obtenido con el Dithane es debido ido a las propiedades que presenta, es un fungicida protectante de contacto que inhibe el desarrollo del tubo germinativo de la espora del hongo, ya que bloquea los procesos enzimáticos a nivel del citoplasma y mitocondria, lo que ocasiona una deficiencia de ATP en la célula.
El área bajo la curva del progreso de la incidencia de la enfermedad fue mayor para el tratamiento Testigo sin sanear que se diferenció del resto. Esto pone de manifiesto que a pesar de que se observó diferencia estadística en algunos momentos de evaluación la antracnosis en las flores también aumentó en las parcelas tratadas por lo que al final del experimento tuvo una incidencia entre 42 y 54 % lo que provocó una perdida notable de las flores.
Al analizar el ANOVA para la incidencia de Botrytis cinerea en frutos se observa que no hubo diferencia estadística entre los tratamientos evaluados, aunque el testigo sin sanear presentó una incidencia con valores relativos más altos, esto podría explicarse por las prácticas culturales (recolección de los frutos afectados por esta enfermedad) realizadas previas a la cosecha (Tabla 6).
El área bajo la curva del progreso de la enfermedad fue mayor para el tratamiento T. sin sanear que se diferenció del resto de los tratamientos. Esto se relaciona con los resultados del análisis de varianza ya que en general la incidencia de Botrytis cinerea, permanecieron bajos en todos los tratamientos, ya que con excepción del testigo sin sanear los demás estuvieron entre 0 y 2,5 %.
La incidencia de la mancha bacteriana en la cuarta semana varió entre 46 y 55 % sin diferencia estadística entre los tratamientos, pero la severidad fue mayor para para P1 y el testigo sin sanear y los menores para ME y CR, el resto de los tratamientos quedaron intermedios entre estos (Tabla 7).
Al analizar los datos de incidencia de la mancha bacteriana en la sexta evaluación se observa que esta variable fue mayor para el Testigo sin sanear (28 %) y las más baja para CR, aunque los tratamientos P1 y Testigo saneado no difieren estadísticamente de este. En ese momento la severidad fue también mayor para Testigo sin sanear y los menores para ME, CR, Testigo saneado y Dithane. En la semana ocho no se observó diferencia estadística para la variable incidencia de la mancha bacteriana, sin embrago la severidad fue menor para CR, ME y el Testigo saneado.
El área bajo la curva del progreso la enfermedad para la incidencia fue mayor para el tratamiento Testigo sin sanear y menor para ME, CR y P1, mientras que el ABCPE para intensidad el valor más alto fue para Testigo saneado y los más bajos desde el punto de vista estadístico para ME y Caldo Rizósfera, Dithane y Testigo saneado lo que está en concordancia con los mejores tratamientos en las evaluaciones en los tres momentos, cuarta, sexta y octava semana.
Discusión
Los resultados demostraron que los biopreparados producidos por ASPAGRO hacen acción sobre los diferentes patógenos del follaje de la fresa en las condiciones de Pamplona, en mayor medida el Caldo Rizósfera y los ME, aunque la eficacia no fue la deseada para la antracnosis en flores y frutos. La diferencia entre el tratamiento sin sanear y el tratamiento ME y Caldo Rizósfera podría explicarse en la eficiencia que tienen estos microorganismos en el mejoramiento del suelo y por la reducción del inóculo en los tratamientos con biopreparados y no en el Testigo sin sanear, lo que ratifica la importancia del saneamiento en el manejo de las enfermedades de la fresa y la necesidad de hacer esta práctica en sistemas de producción limpia o orgánica de fresa para apoyar el efecto de los antagonistas que se están aplicando al cultivo.
Resulta de gran importancia profundizar en las especies bacterias del Caldo Rizósfera, biopreparado donde se informaron las más altas poblaciones de este grupo11.
Dentro de las bacterias que han demostrado tener eficiencia en la solubilizacón de fosfatos en Colombia se encuentran varios géneros destacándose Burkholderia cepacia, Pseudomonas sp, Aeromonahy drophilia, Pseudomonas luteola, Pseudomonas putida, Enterobacter sakasaki, Pantoea sp. y Enterobacter cloacae12.
Los actinomicetos controlan hongos y bacterias patogénicas y también aumentan la resistencia de las plantas, mediante un mecanismo de producción de antibióticos que provocan inhibición de patógenos del suelo y benefician el crecimiento y la actividad de Azotobacter y de las micorrizas13. Algunos actinomicetos han sido descritos como agentes de biocontrol por la capacidad de producir enzimas biodegradativas como quitinasas, glucanasas, peroxidasas y otras14,15.
Estos microorganismos efectivos cuando entran en contacto con materia orgánica secretan substancias beneficiosas como vitaminas, ácidos orgánicos, minerales quelatados y fundamentalmente substancias antioxidantes.
El hecho de que el área bajo la curva del progreso de la incidencia de la antracnosis en flores no tuviera diferencia estadística entre los tratamientos y que para los frutos fuera mayor solo para el tratamiento T. sin sanear con respecto al resto, y que los niveles de la enfermedad al final del experimento tuvieron una incidencia entre 46 y 55 % en flores y entre 56 y 63 % en frutos provocando pérdidas de cosecha, constituye una amenaza para la rentabilidad del agricultor. Por tal motivo se considera que los biopreparados por sí solo no pudieran resolver el problema de la antracnosis bajo las condiciones de Pamplona. Una posibilidad sería combinar los tratamientos biológicos y químicos, dejando los primeros para los momentos de cosecha y cuando los niveles de la enfermedad fueran muy bajos. Por lo tanto, no se tiene una solución con los actuales biopreparados de ASPAGRO para respaldar una Tecnología de producción orgánica de la fresa.
Entre los patógenos de la fresa donde se han destacado la acción de los antagonistas está Botrytis cinerea pudiéndose mencionar otros trabajos16 donde se comprobó la eficacia de Trichoderma, Bacillus subtilis y un complejo biológico a base de bacterias benéficas, así como una investigación donde se evaluaron a Trichoderma harzianum y a T. lignorum contra B cinérea en fresa y se redujo la incidencia y la severidad de la enfermedad17. En otra investigación desarrollada en Cundinamarca se comprobó la acción de Trychoderma lignorum y Saccharomyces cerevisiae para el control de B. cinérea en fresa18.
Al parecer por tener Botrytis cinérea sus conidióforos, conidios y micelio expuestos es más factible el antagonismo por otros microorganismos antagonistas. Los presentes resultados son alentadores y avalan la necesidad de hace mejoras en los productos de ASPAGRO de continuar los estudios de estos sobre todos para ganar en eficacia sobre la antracnosis.
Conclusiones
Los biopreparados de ASPAGRO Caldo Rizósfera y ME resultaros superiores al tratamiento químico con Dithane para mantener a la mancha por Ramularia en niveles de severidad aceptables, al igual que a la mancha bacteriana y la pudrición por Botrytis, y aunque resultaron similares que el control químico contra la antracnosis en hojas, flores y frutos, los niveles de incidencia en flores y frutos no son los deseados, amenazando la rentabilidad del agricultor, por lo que aún constituyen una solución parcial bajo las condiciones climáticas de Pamplona.