NOTA TÉCNICA

Comparación de la determinación de homocisteina total

en plasma o suero


A. Alba, J. Iborra, B. Monreal, J. Aznar, J. Aznar

Unidad de Bioquímica Especializada. Servicio de Biopatología. Hospital La Fe. Valencia. 

Palabras claves: Homocisteina; suero; plasma. 

Key words: Homocysteine; serum; plasma. 

Recibido: 13-VII-01 
Aceptado: 4-IX-01

Correspondencia: Amparo Alba Redondo. 
Unidad de Bioquímica Especializada. Hospital La Fe. 
Avda Campanar, 21. 
46009 Valencia. (España).

Introducción

La homocisteina es un intermediario en el metabolismo de la metionina. Concentraciones elevadas en plasma o suero son un factor independiente para enfermedades vasculares periféricas, trombosis venosas profundas, enfermedades coronarias y defectos en el tubo neural¹. Estudios epidemiológicos han demostrado esta asociación positiva. Los posibles mecanismos aterogénicos pueden ser disfunciones endoteliales, efectos citotóxicos, disminuciones en la liberación de óxido nítrico, incremento de la producción de radicales libres de oxigeno, potenciación de la LDL oxidada, estimulación de la proliferación del músculo liso y alteración de la función plaquetar. Sin embargo, algunos investigadores han postulado que la homocisteina puede causar aterosclerosis dañando directamente el endotelio². También se ha observado que la concentración en plasma de homocisteina aumenta en pacientes con deficiencia de cobalamina y/o folato, vitaminas que influyen en el desarrollo del sistema nervioso central, siendo importante como marcador de las mismas, para evitar las secuelas neurológicas o psiquiátricas (demencia de tipo Alzheimer, depresión, etc) que provocan³. 

Por estas razones, tiene mucha importancia la medida de forma precisa de la homocisteina bien en plasma o en suero, en las que se ha demostrado que los resultados se correlacionan bien⁴. Se han desarrollado varios métodos diferentes, como son el HPLC con preparación manual de las muestras, y los kits semi o totalmente automatizados como el inmunoensayo de fluorescencia polarizada, placas de ELISA y un kit de HPLC con detección electroquímica⁵. 

El estudio se centró en la comparación de la homocisteina en plasma y suero para ver si existe diferencias entre ambas muestras, debido a la comodidad a nivel del laboratorio de la utilización del suero para la mayoría de las pruebas. En nuestro trabajo se contó con el inmunoensayo de fluorescencia polarizada de Abbott IMx con su analizador de IMx® (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), lo cual permite el tratamiento de grandes muestras, dando resultados rápidamente y con un aparataje más sencillo que con el HPLC⁶.

Técnica

Se procesaron 75 muestras de pacientes procedentes de consultas externas del hospital, obtenidas por punción venosa con tubos Vacutainer®, que contenían 5.4 mg EDTA (k2) como anticoagulante (plasma) y en tubo seco Venoject II® (suero), ambos se enfriaron rápidamente en hielo, y en menos de una hora, se centrifugaron durante 10´ a 3000 rpm y 4º C. El plasma y el suero se separaron y se congelaron a ­20º C hasta su análisis. Se utilizó el analizador IMx® para ambas muestras con su respectivo kit de Abbott IMx, el cual es un método bastante exacto y estable para la medida de la homocisteina⁷. La técnica se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del fabricante. 

Los valores de referencia para nuestro laboratorio son de 5-15 µmol /dl. 

El tratamiento estadístico utilizado para analizar los datos fue no paramétrico, correlación de Pearson y t-pareada, valores de p <0.05 fueron considerados significativos. 

La resultados obtenidos del estudio se reflejan en la tabla 1, en donde se observa una correlación excelente entre ambas muestras, así como el valor de la media la cual es similar. 

Discusión 

Estudios realizados anteriormente demuestran que el tiempo transcurrido hasta la centrifugación de la muestra a temperatura ambiente aumenta la concentración de la homocisteina extraeritrocitaria hasta en un 10% si el plazo es de una hora, siendo este incremento mayor si se alarga el tiempo de espera, ello debido a la continua producción en los hematies; mientras que la conservación de la muestra en hielo hace este aumento insignificante⁸. En lo referente a la utilización de anticoagulantes, se han probado el ácido etilendiaminotetracético (EDTA), heparina y citrato sódico, siendo el EDTA quien dá los resultados similares al suero⁴. Lo recomendado en la literatura es utilizar plasma con EDTA y poner las muestras en hielo hasta su centrifugación. Recientes estudios sugieren que la temperatura no es tan decisiva si se utiliza como anticoagulante el fluoruro sódico, aunque da valores menores comparados con el plasma de EDTA ^9,10 y que la homocisteina también se puede determinar en suero¹¹. 

Debido al especial cuidado que requiere la medición de la homocisteina, se pueden producir incrementos artificiales si la manipulación no es correcta. Si la centrifugación se realiza tempranamente, antes de una hora, y a temperatura ambiente, el contacto con los hematies es minimo y la variación de la concentración también. Por esta razón, en teoría es mejor la utilización del plasma que suero, debido al tiempo de espera que requiere el coagulo para su formación, pero que se obvia al poner la muestra en hielo. 

En el presente estudio, al comparar el plasma con el suero, se demostró que la correlación existente entre ambas muestras es excelente (R=0.9909), lo cual nos da total confianza en la utilización del suero para la medición de la homocisteina, en sustitución del plasma.

Bibliografía 

1. Martin SC, Tsakas-Ampatzis I, Bartlett WA, Jones AF.Measurement of plasma total homocysteine by HPLC with coulometric detection. Clin Chem 1999;45:150-2.          [ Links ]

2. Cavalca V, Cighetti G, Babonti F et al. Oxidative stress and Homocysteine in coronary artery disease.Clin Chem 2001;47(5):887-92.          [ Links ]

3. Nilsson K, Gustafson L, Hultberg B. The plasma homocysteine concentration is better than that of serum methylmalonic acid as a marker for sociopsychological performance in a psychogeriatric population. Clin Chem 2000; 46(5):691-96.          [ Links ]

4. Causse E, Issac C, Malatray P et al. Assays for total homocysteine and other thiols by capyllary electrophoresis-laser-induced fluorescence detection. I. Preanalytical condition studies. J Chromatogr A 2000; 895(1-2):173-8.          [ Links ]

5. Pfeiffer CM, Twite D, Shih J, Holets-McCormack SR, Gunter EW. Method comparison for total plasma homocysteine between the Abbot Imx analizer and an HPLC assay with internal standardization. Clin Chem 1999;45(1):150-2.          [ Links ]

6. Shipchandler MT, Moore EG. Rapid, fully automated measurement of plasma homocyst(e)ine with the Abbott IMx analyzer. Clin Chem 1995; 41(7):991-94.          [ Links ]

7. Mansoor MA. Comparison of abbott IMx total homocysteine assay with a high pressure liqiud chromatography method for the measurement of total homocysteine in plasma and serum from a norwegeian population. Scand J Clin Lab Invest 1999; 59:369 ­74.          [ Links ]

8. Ueland PM, Refsum H, Stabler SP, Malinow MR, Andersson A, Allen RH. Total homocysteine in plasma or serum:Methods and clinical applications. Clin Chem 1993; 39:1764-79.          [ Links ]

9. Cali&scedil, Kan S, Kuralay F, Onvural B. Effect of anticoagulants on plasma homocysteine determination. Clin Chim Acta 2001; 309(1):53-56.          [ Links ]

10. Frantzen F, Faaren AL, Alfheim I, Nordhei AK. Enzyme conversion inmunoassay for determinig total homocysteine in plasma or serum. Clin Chem 1998; 42(2):311-16.          [ Links ]

11. Minniti G, Piana A, Armani U, Cerone R. Determination of plasma and serum homocysteine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.J Chromatogr A 1998; 828(1-2):401-5.        [ Links ]