Resumen

PEREZ RICO, A. et al. Selección de genes de referencia en semen equino criopreservado para su uso en estudios de expresión genética con la técnica de PCR cuantitativa. Sanid. Mil. [online]. 2014, vol.70, n.1, pp.20-24. ISSN 1887-8571.  https://dx.doi.org/10.4321/S1887-85712014000100003.

Introducción: La gestión de bancos de germoplasma implica la conservación y uso de dosis seminales, pero también pueden ser una fuente de estudio sobre la calidad de los sementales y las propiedades del semen para su empleo post descongelación. Un criterio para medir la calidad seminal puede basarse en las diferencias de expresión de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la maduración espermática. Objetivo: Análisis de genes expresados en semen equino criopreservado que ofrezcan una adecuada amplificación, especificidad y estabilidad para su empleo como genes de referencia en futuros estudios de expresión genética. Material y métodos: Purificación de espermatozoides vivos mediante un gradiente de concentración discontinua a partir de pajuelas de semen criopreservado correspondiente a cuatro sementales. Extracción orgánica de ácidos ribonucleicos con tratamiento con la enzima desoxiribonucleasa y la amplificación selectiva de siete genes candidatos mediante retrotranscripción y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en un solo paso. Resultados: Tres de los genes seleccionados, β-Actina , Ubiquitina B y proteína Ribosomal L32 se amplifican correctamente. β-Actina , Ubiquitina B manifiestan la mayor estabilidad. Conclusión: En los espermatozoides procedentes de muestras de semen criopreservado equino se puede detectar la presencia de ARNm, siendo el gen de la β-Actina y de la Ubiquitina B los más indicados como genes de referencia de los siete candidatos analizados.

Palabras clave : ARN mensajero; genes de referencia; semen equino criocongelado.

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