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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Efectos beneficiosos en niños sanos del consumo de un producto lácteo que contiene dos cepas probióticas: Lactobacillus coryniformis CECT5711 y Lactobacillus gasseri CECT5714]]></article-title>
<article-title xml:lang="en"><![CDATA[Beneficial effects of consumption of a dairy product containing two probiotic strains: Lactobacillus coryniformis CECT5711 and Lactobacillus gasseri CECT5714 in healthy children]]></article-title>
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<institution><![CDATA[,Puleva Biotech Departamento de Inmunología y Estudios preclínicos ]]></institution>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Objective: In the last decades there has been an increasing interest in the manipulation of intestinal microbiota with probiotics for the prevention and treatment of certain paediatric diseases. In addition, it has been suggested that probiotics could play a role in the development of immune system. Recent studies suggest that the administration of two probiotic strains, Lactobacillus coryniformis CECT5711 and Lactobacillus gasseri CECT5714 improves intestinal function of healthy adults and enhances the immune response. Since there are few studies reporting the use of probiotic in children, the main consumers of these products, the aim of the present study was to analyze the effects of the administration of the mentioned probiotic strains in healthy children. Interventions: 30 children (age range 3-12) with no gastrointestinal pathology were included in the study. In addition to their usual diet, during the first 3 weeks they received 200 ml of a conventional yogurt containing Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus. During the following three weeks this yogurt was substituted for 80 ml of a probiotic product (Max Defensas®, Puleva Food S.L.) containing the same amounts of Streptococcus thermophilus and the L. bulgaricus was substituted by a mixture of the target probiotic strains: L. coryniformis CECT5711 and L. gasseri CECT5714. Samples of faeces and saliva were taken at the beginning of the protocol, at week 3 and at the end of the study. Intestinal microbiota, faecal citotoxicity and the inhibition of Salmonella cholerasusis ssp. cholerasuis adhesion to intestinal mucins by the faeces were analyzed. Finally, IgA concentration was determined in the faecal and saliva samples. Results: Tolerance of the probiotic product was good in all the children included in the study. An increase in faecal lactobacilli counts was shown at the end of the experimental protocol (P < 0,05). In addition citotoxicity of faecal samples was significantly (p < 0.05) reduced after probiotic consumption. The inhibition of S. cholerasuis adhesion to intestinal mucins was significantly higher (P < 0.05) for faecal waters from children in week 6 compared to samples form week 0 and 3. Probiotic consumption was also shown to increase IgA concentration in faeces and saliva (P < 0.05). Conclusions: The consumption of a probiotic product containing L. coryniformis CECT5711 and L. gasseri CECT5714 improves intestinal flora of healthy children, enhancing the defence against gastrointestinal aggressions and infections both by inhibiting pathogen adhesion to intestinal mucins and enhancing the immune function.]]></p></abstract>
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<kwd lng="es"><![CDATA[Probióticos]]></kwd>
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</front><body><![CDATA[ <p align="right"><font size="2" face="Verdana"><b><a name="top"></a>ALIMENTOS FUNCIONALES</b></font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><b><font face="Verdana" size="4">Efectos beneficiosos en ni&ntilde;os sanos del consumo de un producto l&aacute;cteo que contiene dos cepas probi&oacute;ticas. <i>Lactobacillus coryniformis</i> CECT5711 y <i>Lactobacillus gasseri</i> CECT5714</font></b></p>     <p><B><font face="Verdana" size="4">Beneficial effects of consumption of a dairy product containing two probiotic strains, <i>Lactobacillus coryniformis</i> CECT5711 and <i>Lactobacillus gasseri</i> CECT5714 in healthy children</font></B></p>     <p>&nbsp;</p>     <p>&nbsp;</p>     <p><B><font size="2" face="Verdana">F. Lara-Villoslada, S. Sierra, J. Boza, J. Xaus y M. Olivares</font></B></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Departamento de Inmunolog&iacute;a y Estudios precl&iacute;nicos. Puleva Biotech. Granada. España.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana"><a href="#bajo">Dirección para correspondencia</a></font></p>     <p>&nbsp;</p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp;</p> <hr size="1">     <p><b><font size="2" face="Verdana">RESUMEN</font></b></p>     <p><b><font size="2" face="Verdana">Objetivo o antecedente:</b> En las &uacute;ltimas d&eacute;cadas la manipulaci&oacute;n de la microbiota intestinal mediante el uso de probi&oacute;ticos ha adquirido un gran inter&eacute;s en el tratamiento y prevenci&oacute;n de determinadas patolog&iacute;as infantiles. Adem&aacute;s actualmente existen multitud de estudios que demuestran que las bacterias probi&oacute;ticas podr&iacute;an tener un importante papel en el desarrollo del sistema inmunitario. Estudios recientes sugieren que dos cepas probi&oacute;ticas, <I>Lactobacillus coryniformis </I>CECT5711 y <I>Lactobacillus gasseri</I> CECT5714 mejoran la funci&oacute;n intestinal de adultos sanos y potencian la respuesta inmunitaria. Dado que son muy pocos los estudios que analizan el papel de los probi&oacute;ticos en ni&ntilde;os sanos, principales consumidores de estos productos, el objetivo del presente trabajo fue analizar los efectos de la administraci&oacute;n conjunta de estas dos cepas probi&oacute;ticas en un producto l&aacute;cteo fermentado en ni&ntilde;os sanos.    <BR><b>Intervenciones:</b> Se reclutaron 30 ni&ntilde;os de entre 3 y 12 a&ntilde;os sin patolog&iacute;a gastrointestinal conocida. Adem&aacute;s de su dieta habitual, durante las 3 primeras semanas los ni&ntilde;os recibieron 200 ml de un yogurt convencional que conten&iacute;a <I>Lactobacillus bulgaricus</I> y <I>Streptococcus thermophilus</I>. A continuaci&oacute;n este yogurt se sustituy&oacute; por 80 ml de un producto probi&oacute;tico (Max Defensas<sup>&reg;</sup> Puleva FOOD S.L.) que conten&iacute;a la misma cantidad de <I>Streptococcus thermophilus</I> y donde el <I>L. bulgaricus</I> fue substituido por la misma cantidad de una mezcla de las bacterias probi&oacute;ticas objeto del estudio: <I>L. coryniformis</I> CECT5711 y <i>L. gasseri</i> CECT5714. Se tomaron muestras de heces y de saliva al comienzo del estudio, a las 3 semanas y al finalizar el estudio. Durante estas 6 semanas los ni&ntilde;os no tomaron otro yogurt o probi&oacute;tico que no fueran los citados anteriormente. Se analiz&oacute; la microbiotafecal de los ni&ntilde;os, la toxicidad de las aguas fecales y la capacidad de &eacute;stas para inhibir la adhesi&oacute;n de <I>Salmonella cholerasusis ssp. cholerasuis</I> a mucinas intestinales. Finalmente se determin&oacute; la concentraci&oacute;n de IgA en heces y en saliva.    <BR><b>Resultados:</b> El consumo del producto probi&oacute;tico objeto del estudio fue bien tolerado por todos los ni&ntilde;os. Se observ&oacute; un aumento del n&uacute;mero de lactobacilos en las heces tras 3 semanas de consumo del probi&oacute;tico. Adem&aacute;s la toxicidad de las aguas fecales fue significativamente inferior tras el consumo del probi&oacute;tico (P &lt; 0,05). La inhibici&oacute;n de la adhesi&oacute;n de <I>S. cholerasuis</I> a mucinas intestinales fue significativamente (P &lt; 0,05) mayor con las aguas fecales de los ni&ntilde;os tras el consumo del probi&oacute;tico en comparaci&oacute;n con los homogeneizados iniciales y los obtenidos tras el consumo del yogurt convencional. Por&uacute;ltimo, el consumo del probi&oacute;tico aument&oacute; significativamente la concentraci&oacute;n de IgA en las heces y en la saliva (P &lt; 0,05).    <BR><b>Conclusiones:</b> La administraci&oacute;n de un producto probi&oacute;tico que contiene <I>L. coryniformis</I> CECT5711 y <I>L. gasserii</I> CECT5714 mejora la flora intestinal de ni&ntilde;os sanos, favoreciendo la defensa frente a agresiones e infecciones gastrointestinales por inhibici&oacute;n de la adhesi&oacute;n de pat&oacute;genos y potenciaci&oacute;n de la respuesta inmunitaria.</font></p>     <p><font face="Verdana" size="2"><B>Palabras clave:</B> Probi&oacute;ticos. Ni&ntilde;os. Tracto gastrointestinal. Sistema inmunitario.</font></p> <hr size="1">     <p><B><font size="2" face="Verdana">ABSTRACT</font></B></p>     <p><b><font size="2" face="Verdana">Objective:</b> In the last decades there has been an increasing interest in the manipulation of intestinal microbiota with probiotics for the prevention and treatment of certain paediatric diseases. In addition, it has been suggested that probiotics could play a role in the development of immune system. Recent studies suggest that the administration of two probiotic strains, <I>Lactobacillus coryniformis</I> CECT5711 and <I>Lactobacillus gasseri</I> CECT5714 improves intestinal function of healthy adults and enhances the immune response. Since there are few studies reporting the use of probiotic in children, the main consumers of these products, the aim of the present study was to analyze the effects of the administration of the mentioned probiotic strains in healthy children.<b>    <br>Interventions:</b> 30 children (age range 3-12) with no gastrointestinal pathology were included in the study. In addition to their usual diet, during the first 3 weeks they received 200 ml of a conventional yogurt containing <I>Lactobacillus bulgaricus</I> and <I>Streptococcus thermophilus</I>. During the following three weeks this yogurt was substituted for 80 ml of a probiotic product (Max Defensas<sup>&reg;</sup>, Puleva Food S.L.) containing the same amounts of Streptococcus thermophilus and the <I>L. bulgaricus</I> was substituted by a mixture of the target probiotic strains: <I>L. coryniformis</I> CECT5711 and <I>L. gasseri</I> CECT5714. Samples of faeces and saliva were taken at the beginning of the protocol, at week 3 and at the end of the study. Intestinal microbiota, faecal citotoxicity and the inhibition of <I>Salmonella cholerasusis ssp. cholerasuis</I> adhesion to intestinal mucins by the faeces were analyzed. Finally, IgA concentration was determined in the faecal and saliva samples.<b>    ]]></body>
<body><![CDATA[<br>Results:</b> Tolerance of the probiotic product was good in all the children included in the study. An increase in faecal lactobacilli counts was shown at the end of the experimental protocol (P &lt; 0,05). In addition citotoxicity of faecal samples was significantly (p &lt; 0.05) reduced after probiotic consumption. The inhibition of <I>S. cholerasuis</I> adhesion to intestinal mucins was significantly higher (P &lt; 0.05) for faecal waters from children in week 6 compared to samples form week 0 and 3. Probiotic consumption was also shown to increase IgA concentration in faeces and saliva (P &lt; 0.05).<b>    <br>Conclusions:</b> The consumption of a probiotic product containing <I>L. coryniformis</I> CECT5711 and <I>L. gasseri</I> CECT5714 improves intestinal flora of healthy children, enhancing the defence against gastrointestinal aggressions and infections both by inhibiting pathogen adhesion to intestinal mucins and enhancing the immune function.</font></p>     <p><font face="Verdana" size="2"><B>Key words:</B>  Probiotics. Gastrointestinal tract. Inmune system.</font></p> <hr size="1">     <p>&nbsp;</p>     <p><b><font face="Verdana" size="3">Introducci&oacute;n</font></b></p>     <p><font size="2" face="Verdana">El tracto gastrointestinal humano es el h&aacute;bitat de una gran cantidad y variedad de microorganismos. De hecho, se calcula que en un adulto la cantidad total de bacterias a nivel intestinal (10<sup>14</sup> ufc) es diez veces superior al total de c&eacute;lulas eucariotas del organismo<sup>1</sup> . La presencia de estas bacterias no es casual, sino que juegan un papel importante en el correcto desarrollo y funcionamiento del organismo.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Las bacterias que constituyen la microbiota intestinal son metab&oacute;licamente activas e interaccionan continuamente con el ambiente que les rodea (sistema inmunitario de las mucosas, otras bacterias, epitelio intestinal, etc.) por lo que son capaces de influir significativamente en el desarrollo post-natal y, en general, en la fisiolog&iacute;a del hospedador<sup>2</sup>. Por esta raz&oacute;n existe un inter&eacute;s creciente en el estudio de la manipulaci&oacute;n de la microbiota intestinal, con objeto no s&oacute;lo de mejorar la funci&oacute;n intestinal sino tambi&eacute;n conseguir otros efectos beneficiosos. La administraci&oacute;n de probi&oacute;ticos, que se definen como microorganismos vivos que administrados en cantidades adecuadas aportan un beneficio para la salud del hospedador<sup>3</sup>, ha sido muy estudiada en las &uacute;ltimas dos d&eacute;cadas precisamente como medio para modificar la microbiota intestinal e influir en las funciones fisiol&oacute;gicas en las que est&aacute; implicada.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">As&iacute;, diferentes estudios cl&iacute;nicos demuestran que la administraci&oacute;n de probi&oacute;ticos es efectiva en la prevenci&oacute;n y tratamiento de diferentes trastornos gastrointestinales. La administraci&oacute;n de probi&oacute;ticos ha demostrado ser eficaz en la reducci&oacute;n de la incidencia y del tiempo de duraci&oacute;n de distintos tipos de diarrea: diarrea asociada a antibi&oacute;ticos<sup>4</sup>, gastroenteritis por rotavirus<sup>5</sup> o diarrea nosocomial<sup>6</sup>. El tratamiento con probi&oacute;ticos se ha probado tambi&eacute;n en la inflamaci&oacute;n intestinal, otra patolog&iacute;a en la que la microbiota juega un papel clave. En pacientes con colitis ulcerosa la administraci&oacute;n oral de una cepa no pat&oacute;gena de <I>Escherichia coli</I> tuvo la misma eficacia que la mesalazina en el mantenimiento de la remisi&oacute;n de la enfermedad<sup>7</sup>.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">No obstante, el efecto de los probi&oacute;ticos no se limita a la mejora de la funci&oacute;n intestinal, sino que diferentes estudios cl&iacute;nicos han demostrado que estas bacterias podr&iacute;an tener tambi&eacute;n efectos sist&eacute;micos y participar en la regulaci&oacute;n del sistema inmunitario. As&iacute;, Schiffrin y cols., han demostrado que el consumo de ciertas cepas de probi&oacute;ticos durante tres semanas aumenta la capacidad fagoc&iacute;tica de leucocitos perif&eacute;ricos en adultos sanos<sup>8</sup>. Tambi&eacute;n se han observado efectos interesantes en la respuesta a vacunas, y as&iacute; se ha demostrado una mejor respuesta a la inmunizaci&oacute;n frente a <I>Salmonella cholerasuis</I> en voluntarios que consumieron un yogurt con probi&oacute;ticos<sup>9</sup>.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">A pesar de sus demostrados efectos beneficiosos, los estudios sobre el uso de probi&oacute;ticos en ni&ntilde;os se han limitado al tratamiento de ciertas patolog&iacute;as, especialmente la diarrea. Por ejemplo, se ha demostrado que la administraci&oacute;n de <i>Bifidobacterium bifidum</i> y <i>Streptococcus thermophilus</i> reduce la incidencia de diarrea aguda en ni&ntilde;os hospitalizados<sup>5</sup>. Sin embargo el uso de probi&oacute;ticos en ni&ntilde;os sanos est&aacute; muy poco documentado, a pesar de que constituyen el principal colectivo consumidor de estos productos. El reciente descubrimiento de bacterias probi&oacute;ticas en la leche humana<sup>10</sup>, y su posible relaci&oacute;n con los efectos beneficioso de la lactancia, avala la utilizaci&oacute;n de estas bacterias tambi&eacute;n durante la edad infantil, en la que podr&iacute;an jugar un importante papel en el correcto funcionamiento del tracto gastrointestinal y en el desarrollo del sistema inmunitario.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Recientes trabajos de nuestro laboratorio han demostrado que la administraci&oacute;n conjunta de <I>Lactobacillus coryniformis</I> CECT5711 y <I>Lactobacillus gasseri</I> CECT5714 mejora la funci&oacute;n intestinal de adultos sanos<sup>11</sup> y estimula la respuesta inmunitaria innata y tambi&eacute;n la espec&iacute;fica<sup>12</sup>. Dados los resultados positivos del estudio en adultos sanos y la escasez de estudios cl&iacute;nicos que eval&uacute;en los beneficiosos de los probi&oacute;ticos en ni&ntilde;os sin patolog&iacute;a gastrointestinal, el objetivo de este estudio fue analizar si la administraci&oacute;n conjunta de las dos cepas probi&oacute;ticas citadas anteriormente ten&iacute;a efectos beneficiosos en ni&ntilde;os sanos, evaluando la funci&oacute;n intestinal y los posibles efectos sobre el sistema inmunitario.</font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><b><font face="Verdana">Material y m&eacute;todos</font></b></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">Voluntarios y protocolo del estudio</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Todos los voluntarios incluidos en este estudio fueron ni&ntilde;os con edades comprendidas entre los 3 y los 12 a&ntilde;os sin enfermedad gastrointestinal conocida. La prescripci&oacute;n facultativa de tratamiento antibi&oacute;tico en alg&uacute;n momento de las 6 semanas de duraci&oacute;n del estudio supondr&iacute;a la exclusi&oacute;n del voluntario del mismo. Sin embargo se consigui&oacute; reclutar a 30 ni&ntilde;os (17 ni&ntilde;os y 13 ni&ntilde;as) de edad media 5,53 &plusmn; 2,87 y todos ellos completaron el estudio.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">El protocolo se dividi&oacute; en 2 periodos: las 3 primeras semanas los ni&ntilde;os consumieron diariamente, adem&aacute;s de su dieta habitual, 200 ml de un yogurt (Puleva Food S. L., Espa&ntilde;a) que conten&iacute;a 2 x 10<sup>7</sup> ufc de <I>Lactobacillus bulgaricus</I> sp. <I>delbrueki</I> y 5 x 10<sup>5</sup> ufc/ml de <I>S. thermophilus</I>, con el prop&oacute;sito de homogenizar la poblaci&oacute;n objeto de estudio y habituar a los voluntarios al consumo de este producto. Las 3 semanas restantes los voluntarios consumieron diariamente un producto probi&oacute;tico consistente en 80 ml de una leche fermentada (Puleva Max defensas<sup>&reg;</sup>, Puleva Food S. L., Espa&ntilde;a) que conten&iacute;a la misma concentraci&oacute;n de <I>S. thermophilus</I> que el yogurt anterior pero se sustituy&oacute; el <I>L. bulgaricus</I> por una mezcla de <I>L. coryniformis</I> CECT5711 (1,8 x 10<sup>7</sup> cfu/g) y <I>L. gasseri</I> CECT5716 (0,2 x 107 cfu/g). Durante todo el estudio los voluntarios no tomaron ning&uacute;n producto l&aacute;cteo fermentado que no fueran los descritos anteriormente. El protocolo se llev&oacute; a cabo de acuerdo con la declaraci&oacute;n de Helsinki y se obtuvo consentimiento informado de los padres de los ni&ntilde;os.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">Determinaciones</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Se tomaron muestras de heces y saliva al principio (t0) a las 3 semanas (t3) y al final del estudio (t6). Las muestras de heces se utilizaron para analizar la composici&oacute;n microbiana, contenido de agua, concentraci&oacute;n de IgA y toxicidad de las aguas fecales. Adem&aacute;s se analiz&oacute; la capacidad de las aguas fecales para inhibir la adhesi&oacute;n de <I>Salmonella cholerasuis</I> ssp. <I>cholerasuis</I> a mucinas intestinales. Las muestras de saliva se utilizaron para determinar la concentraci&oacute;n de IgA.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">An&aacute;lisis de la composici&oacute;n microbiana de las heces</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Para evaluar la composici&oacute;n microbiana, las muestras de heces fueron homogenizadas en agua de peptona tamponada. Diluciones apropiadas fueron cultivadas en superficie en placas de los medios adecuados a cada bacteria: MRS agar (Oxoid, Basingstoke, UK) para lactobacilos, MRS agar suplementado con 0,5 mg/L dicloxacilina, 1 g/L LiCl y 0,5 g/L hidrocloruro de L-ciste&iacute;na para bifidobacterias, <i> Reinforced Clostri-dial</i> suplementado con 20 &mu;g/ml de polimixina para clostridios, <i>Esculine Bile Agar</i> para bacteroides. Para el cultivo de enterobacterias y aerobios totales se utilizaron <i>Petrifilms</i> (3M St Paul, MN). Las placas fueron incubadas a 37 ºC durante 24 h en condiciones de anaerobiosis para la cuantificaci&oacute;n de lactobacilos, bifidobacterias, bactaeroides y clostridios y en condiciones de aerobiosis para la cuantificaci&oacute;n de enterobacterias y aerobios totales. Las concentraciones finales fueron expresadas en log ufc/g de heces. Las colonias de lactobacilos en las muestras del t6 fueron identificadas mediante el m&eacute;todo de la reacci&oacute;n en cadena de la polimerasa (PCR) para comprobar cu&aacute;ntos de los voluntarios presentaban las cepas administradas (<I>L. coryniformis</I> y <I>L. gasseri</I>).</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><i><font size="2" face="Verdana">Determinaci&oacute;n del contenido de agua de las heces</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">El contenido de agua de las heces se determin&oacute; por diferencia de peso antes y despu&eacute;s de secar las muestras en estufa a 60 ºC durante 3 d&iacute;as. Los resultados se expresaron en porcentaje de agua.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">Citotoxicidad de las aguas fecales</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Las heces de los voluntarios se resuspendieron en agua de peptona tamponada a la concentraci&oacute;n de 100 mg/ml y se centrifugaron a 13.000xg durante 5 min para recoger los sobrenadantes que son las denominadas aguas fecales. Para analizar la actividad citot&oacute;xica de estas aguas fecales se utiliz&oacute; un ensayo de lisis celular previamente descrito<sup>14</sup>. Se utiliz&oacute; una l&iacute;nea celular de adenocarcinoma humano (HT-29). Las c&eacute;lulas se cultivaron en DMEM (Life Technologies, Rockville, MD) con suero fetal bovino (100 g/l), L-glutamina (300 mg/L), penicilina (100.000 U/L) y estreptomicina (100 mg/L) a 37 ºC en una atm&oacute;sfera humidificada con 5% de CO 2 . Las c&eacute;lulas fueron cultivadas en placas de 96 pocillos (50.000 c&eacute;lulas/pocillo). Tras centrifugar los homogeneizados fecales, los sobrenadantes fueron filtrados (filtros de 0,45 &mu;m de di&aacute;metro de poro) y a&ntilde;adidos a 50 &mu;g/ml a las c&eacute;lulas. Los cultivos fueron incubados durante 24 h y posteriormente las c&eacute;lulas se lavaron dos veces con tamp&oacute;n fosfato y se fijaron con formaldeh&iacute;do al 4% durante 30 min a temperatura ambiente. A continuaci&oacute;n y despu&eacute;s de dos lavados en agua bidestilada las c&eacute;lulas se ti&ntilde;eron con cristal violeta al 0,1% durante 20 min. Finalmente despu&eacute;s de dos lavados m&aacute;s las c&eacute;lulas se dejaron secar a 37 ºC y se procedi&oacute; al revelado con HCl 0,1 M durante 5 min, midiendo la absorbancia a 630 nm. Se utilizaron como control negativo algunos pocillos en los que no se a&ntilde;adi&oacute; sobrenadante y cada punto se midi&oacute; por cuadruplicado.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">Inhibici&oacute;n de la adhesi&oacute;n de Salmonella cholerasuis ssp. cholerasuis a mucinas intestinales</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">La adhesi&oacute;n de la bacteria a mucinas se determin&oacute; siguiendo un m&eacute;todo previamente descrito<sup>15</sup>. De forma breve, 100 &mu;l de una soluci&oacute;n (1 mg/ml) de mucina de cerdo (Sigma, St Louis, MO, USA) en soluci&oacute;n salina tamponada HEPES Hank (HH) fueron adicionados a cada pocillo de una placa de poliestireno de 96 pocillos. Despu&eacute;s de una incubaci&oacute;n de 12 h a 4 ºC, los pocillos se lavaron con 250 &mu;l de la soluci&oacute;n HH. En paralelo la bacteria se cultiv&oacute; durante 12 h a 37 ºC en Tryptic Soy Broth (TSB) en tubos de 1 ml. Tras centrifugaci&oacute;n de estos tubos los sedimentos se resuspendieron en 10 &mu;l de una soluci&oacute;n de carboxifluoresce&iacute;na 10 mM (Sigma) y se incubaron a 37 ºC durante 20 min. Finalmente las bacterias se sometieron a 3 lavados con la soluci&oacute;n HH y resuspendidas en 1 ml de HH. 50 &mu;l de cada suspensi&oacute;n de bacterias fluorescentes (5 x 10<sup>7</sup> cfu) fueron a&ntilde;adidos a cada pocillo junto con 50 &mu;l de las aguas fecales o 50 &mu;l de tamp&oacute;n fosfato pot&aacute;sico como control. Tras 1h de incubaci&oacute;n a 37 ºC los pocillos se sometieron a 2 lavados en soluci&oacute;n HH con objeto de eliminar las bacterias no adheridas a la mucina.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Las c&eacute;lulas adheridas fueron despegadas mediante incubaci&oacute;n a 60 ºC durante 1h en presencia de 50&mu;l/pocillo de una soluci&oacute;n con lauril-sulfato s&oacute;dico (1%) y NaOH (0,1 M). Por &uacute;ltimo, se midi&oacute; la fluorescencia mediante un lector autom&aacute;tico (Tecan Austria GMBH, Salzburg, Austria). La adhesi&oacute;n se expres&oacute; en porcentaje de c&eacute;lulas adheridas en funci&oacute;n de las c&eacute;lulas iniciales. Los homogeneizados fecales de cada voluntario fueron analizados por cuadruplicado.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">Determinaci&oacute;n de la concentraci&oacute;n de IgA</font></i></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Se utiliz&oacute; un m&eacute;todo de ELISA comercial (Bethyl laboratories) siguiendo las instrucciones del fabricante.</font></p>     <p><i><font size="2" face="Verdana">An&aacute;lisis estad&iacute;stico</font></i></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana">Los resultados se analizaron con el programa SPSS (versi&oacute;n 12.0, Chicago, EE.UU.) y se expresan como media &plusmn; error est&aacute;ndar medio (EEM). El an&aacute;lisis del efecto longitudinal de los productos fermentados en los diferentes tiempos se llev&oacute; a cabo mediante ANOVA de una v&iacute;a con medidas repetidas seguido del test-t pareado. Las diferencias fueron consideradas estad&iacute;sticamente significativas para valores de P &lt; 0,05.</font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><B><font face="Verdana">Resultados</font></B></p>     <p><font size="2" face="Verdana">El producto probi&oacute;tico fue bien tolerado por todos los voluntarios sin que ninguno de ellos manifestara ning&uacute;n efecto adverso relacionado con el consumo de dicho producto. Adem&aacute;s las caracter&iacute;sticas organol&eacute;pticas del producto fueron muy bien aceptadas. La evaluaci&oacute;n de los voluntarios revel&oacute; que la salud de los participantes fue buena durante todo el estudio. La flora fecal de los voluntarios fue analizada al inicio del estudio y al final de cada etapa del protocolo (t3 y t6). Como se observa en la <a href="#t1"> tabla I</a>, la ingesta de 200 ml de un yogurt convencional no modific&oacute; de forma significativa la microbiota fecal de los voluntarios (t0 vs t3). Sin embargo, tras 3 semanas de ingesta diaria del producto que conten&iacute;a <i> L. coryniformis</i> y <i> L. gasseri</i> el n&uacute;mero de lactobacilos en las heces de los voluntarios aument&oacute; de forma significativa (t3 vs t6) (P &lt; 0,05). Adem&aacute;s las colonias de lactobacilos obtenidas a las 6 semanas (t6) fueron identificadas por PCR, encontr&aacute;ndose <i> L.coryniformis</i> en el 97% de los voluntarios y <i> L. gasseri</i> en el 50% (datos no mostrados). El resto de poblaciones bacterianas no se vieron afectadas de forma significativa (P &lt; 0,05) por el consumo del yogurt convencional ni por el producto que conten&iacute;a las cepas conten&iacute;a las cepas probi&oacute;ticas objeto de estudio. Tampoco se modific&oacute; la consistencia de las heces de los voluntarios, como se demuestra por el contenido de agua que no se vio modificado de forma significativa a lo largo del estudio.</font></p>     <p align="center"><font face="Verdana"><a name="t1"><img src="/img/revistas/nh/v22n4/alimentos_t1.gif" width="296" height="231"></a></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">La actividad metab&oacute;lica de la microbiota intestinal y la cantidad de agua de las heces tienen una gran influencia en la concentraci&oacute;n de metabolitos t&oacute;xicos en el intestino. Para analizar este aspecto se estudi&oacute; la toxicidad de las aguas fecales de los voluntarios sobre una l&iacute;nea celular de intestino humano. Nuestros resultados demuestran que la ingesta diaria del probi&oacute;tico produjo una disminuci&oacute;n significativa de la citoxicidad de los homogeneizados fecales (<a href="#f1">fig. 1</a>). Este resultado, junto con el mayor contenido de lactobacilos en la heces de los voluntarios, sugiere que el probi&oacute;tico modifica la flora intestinal de los ni&ntilde;os reduciendo la producci&oacute;n de metabolitos t&oacute;xicos. Uno de los efectos beneficiosos m&aacute;s documentados de los probi&oacute;ticos es la capacidad de prevenir las infecciones gastrointestinales por microorganismos pat&oacute;genos. Con objeto de analizar este aspecto, se midi&oacute; la capacidad de inhibici&oacute;n de adhesi&oacute;n de <I>Salmonella cholerasuis</I> a mucinas intestinales por los homogeneizados fecales. La <a href="#f2">figura 2</a> muestra c&oacute;mo las aguas fecales del t6 producen una inhibici&oacute;n de la adhesi&oacute;n de <I>Salmonella</I> a mucinas intestinales significativamente mayor que las muestras del t0 y t3. Estos datos sugieren que las cepas de lactobacilos incluidas en el probi&oacute;tico podr&iacute;an ser las responsables de este efecto. Por &uacute;ltimo, se trat&oacute; de evaluar el impacto que ten&iacute;a el consumo del probi&oacute;tico en algunos par&aacute;metros inmunol&oacute;gicos de ni&ntilde;os sanos. Concretamente se determin&oacute; la concentraci&oacute;n de IgA, puesto que esta inmunoglobulina es la principal responsable de la defensa espec&iacute;fica frente a microorganismos pat&oacute;genos a nivel de las mucosas. Nuestros resultados muestran que la concentraci&oacute;n de IgA en las heces de los voluntarios aument&oacute; de forma significativa a las 6 semanas (<a href="#f2">fig. 2</a>). Este aumento se vio tambi&eacute;n reflejado en las muestras de saliva, lo que sugiere que las cepas <I>L. coryniformis</I> y <I>L. gasseri</I> tienen un importante efecto potenciador de la defensa frente a microorganismos pat&oacute;genos que adem&aacute;s no se limita al &aacute;mbito gastrointestinal sino que se extiende a otras mucosas.</font></p>     <p align="center"><font face="Verdana"><a name="f1"><img src="/img/revistas/nh/v22n4/alimentos_f1.gif" width="290" height="263"></a></font></p>     <p align="center"><font face="Verdana"><a name="f2"><img src="/img/revistas/nh/v22n4/alimentos_f2.gif" width="297" height="251"></a></font></p>     <p align="center"><font face="Verdana"><img src="/img/revistas/nh/v22n4/alimentos_f3.gif" width="297" height="498"></font></p>     <p>&nbsp;</p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b><font face="Verdana">Discusi&oacute;n</font></b></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Diferentes estudios cl&iacute;nicos han demostrado que el consumo de probi&oacute;ticos es eficaz en la prevenci&oacute;n y tratamiento de determinadas enfermedades infantiles, especialmente aquellas que afectan al tracto gastrointestinal. Sin embargo son pocos los estudios que han evaluado el efecto beneficioso de estas bacterias en ni&ntilde;os sanos, probablemente debido a la dificultad de tomar determinadas muestras en este tipo de voluntarios. Por esta raz&oacute;n nos propusimos como objetivo analizar los efectos beneficiosos de dos cepas probi&oacute;ticas: <I>L. coryniformis</I> CECT5711 y <I>L. gasseri</I> CECT5714 en ni&ntilde;os sanos de entre 3 y 12 a&ntilde;os. Se analizaron los beneficios de estas bacterias a nivel gastrointestinal y tambi&eacute;n su posible implicaci&oacute;n en la respuesta inmunitaria frente a microorganismos pat&oacute;genos. Nuestros resultados muestran que el consumo del probi&oacute;tico durante 3 semanas modifica la flora intestinal de ni&ntilde;os sanos, aumentando el contenido de bacterias del g&eacute;nero Lactobacillus. Está ampliamente descrito que este tipo de bacterias tiene importantes beneficios en la mejora de la funci&oacute;n intestinal y tambi&eacute;n existe un creciente inter&eacute;s en el estudio de sus posibles efectos inmuno-moduladores<sup>16</sup>. En un reciente estudio cl&iacute;nico llevado a cabo en nuestro laboratorio ya se demostr&oacute; que el consumo del mismo producto probi&oacute;tico objeto de este trabajo aumenta el n&uacute;mero de lactobacilos presentes en las heces de adultos sanos<sup>11</sup>. Adem&aacute;s este producto mejor&oacute; la funci&oacute;n intestinal de los voluntarios, aumentando el volumen y la frecuencia de las deposiciones y mejorando su percepci&oacute;n de bienestar.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">En el presente trabajo, el aumento de lactobacilos en las heces de los ni&ntilde;os estuvo acompa&ntilde;ado de una menor actividad citot&oacute;xica de dichas heces, lo que sugiere que estas bacterias podr&iacute;an favorecer el proceso de detoxificaci&oacute;n a nivel intestinal. De hecho se ha publicado que el consumo de probi&oacute;ticos reduce la carga de agentes genot&oacute;xicos a nivel intestinal y se ha relacionado este efecto con una posible actividad anticarcinog&eacute;nica en un modelo animal de c&aacute;ncer de colon<sup>17</sup>.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">Adem&aacute;s de mejorar la funci&oacute;n intestinal, el producto probi&oacute;tico que contiene <I>L. coryniformis</I> y <I>L. gassseri</I> podr&iacute;a tener efectos muy beneficiosos en la defensa del ni&ntilde;o frente a infecciones gastrointestinales. Nuestros resultados muestran que tras 3 semanas de consumo del probi&oacute;tico las heces de los ni&ntilde;os presentaban una actividad inhibitoria de la adhesi&oacute;n de <I>Salmonella cholerasuis</I> a mucinas intestinales. Aunque habr&iacute;a que analizarlo en mayor profundidad, la producci&oacute;n de sustancias antimicrobianas por parte de las bacterias probi&oacute;ticas podr&iacute;a estar implicada en este efecto. Este aspecto no se ha evaluado en el presente trabajo, pero diferentes estudios demuestran que estas bacterias producen&aacute;cidos grasos de cadena corta que disminuyen el pH creando un ambiente hostil para las bacterias pat&oacute;genas<sup>18</sup>. Tambi&eacute;n se ha demostrado la producci&oacute;n de sustancias antimicrobinas por diferentes especies del g&eacute;nero Lactobacillus<sup>19</sup>.La inhibici&oacute;n de la adhesi&oacute;n de bacterias pat&oacute;genas al epitelio intestinal, que supone un primer paso en el proceso infeccioso, podr&iacute;a deberse tambi&eacute;n a la competici&oacute;n que se establece entre estas bacterias y los lactobacilos. En este trabajo se han utilizado aguas fecales, que no contienen bacterias, y por tanto la competici&oacute;n entre bacterias no ser&iacute;a v&aacute;lida para explicar el efecto observado. Sin embargo este mecanismo de competici&oacute;n ha sido previamente descrito en varias publicaciones que demuestran que ciertas especies del g&eacute;nero <I>Lactobacillus</I> inhiben la adhesi&oacute;n de pat&oacute;genos como <I>Escherichia coli</I> a c&eacute;lulas intestinales<sup>20</sup>. Parece que las adhesinas recientemente encontradas en la superficie de estas bacterias probi&oacute;ticas podr&iacute;an jugar un papel clave en este efecto antiinfeccioso<sup>20</sup>. Otro posible mecanismo a trav&eacute;s del cual las bacterias probi&oacute;ticas podr&iacute;an proteger frente a infecciones es su posible efecto inmuno-modulador. En este sentido nuestros resultados demuestran que el consumo del producto probi&oacute;tico durante 3 semanas aumenta significativamente los niveles de IgA, no s&oacute;lo en las heces de los ni&ntilde;os sino tambi&eacute;n en las muestras de saliva. Los efectos inmuno-moduladores de <I>L. coryniformis</I> y <I>L. gasseri</I> en adultos sanos han sido recientemente publicados<sup>12</sup>. Seg&uacute;n este estudio, el consumo de este mismo producto probi&oacute;tico durante 4 semanas produjo un aumento significativo de IgA en el suero de adultos sanos, aunque la concentraci&oacute;n de IgA en heces no se modific&oacute; de forma significativa. Adem&aacute;s se observ&oacute; un aumento significativo de la actividad <I>Natural Killer</I> y de la fagocitosis en los adultos que consumieron el probi&oacute;tico durante 4 semanas. Tambi&eacute;n se observ&oacute; un aumento de la IL-10 en el suero de los voluntarios. Esta citoquina inmunomoduladora podr&iacute;a ser responsable de la mayor producci&oacute;n de IgA, ya que se ha descrito que la IL-10 favorece la respuesta Th3 en la que la producci&oacute;n de IgA est&aacute; favorecida. Aunque por motivos&eacute;ticos no se pudieron tomar muestras de sangre de los ni&ntilde;os, el aumento de IgA en las heces y en la saliva, junto con los resultados observados en adultos, sugiere que las cepas <I>L. coryniformis</I> y <I>L. gasseri</I> tienen actividad inmuno-moduladora tambi&eacute;n en ni&ntilde;os, favoreciendo la defensa frente a infecciones. La interacci&oacute;n de los probi&oacute;ticos con el sistema inmunitario ha cobrado un gran inter&eacute;s y se ha relacionado con los efectos positivos de los probi&oacute;ticos en patolog&iacute;as frecuentes en ni&ntilde;os como la alergia a la prote&iacute;na de la leche de vaca o la dermatitis at&oacute;pica<sup>22</sup>. Sin embargo, hasta ahora no exist&iacute;an estudios que mostraran esta actividad inmunomoduladora en ni&ntilde;os sanos.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana">En definitiva podemos concluir que el consumo durante 3 semanas de un producto probi&oacute;tico que contiene <I>L. coryniformis</I> y <I>L. gasseri</I> es bien tolerado por ni&ntilde;os de entre 3 y 12 a&ntilde;os, modificando la microbiota intestinal de &eacute;stos. Probablemente debido a esta alteraci&oacute;n de la microbiota, el producto probi&oacute;tico estudiado reduce la presencia de t&oacute;xicos a nivel intestinal y mejora la defensa del ni&ntilde;o frente a infecciones intestinales. Adem&aacute;s, y aunque ser&iacute;an necesarios m&aacute;s estudios para confirmarlo, nuestros resultados sugieren que el efecto inmuno-modulador del probi&oacute;tico no se limita al intestino sino que podr&iacute;a extenderse a otros tejidos.</font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><B><font face="Verdana">Referencias</font></B></p>     <!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">1. Holzapfel WH, Hebrer P, Snel J y cols. Overview of gut flora and probiotics. Int J Food Microbiol 1998; 41:85-101.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509210&pid=S0212-1611200700060001400001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">2. Guarner F, Malagelada JR. Gut flora in health and disease. Lancet 2002; 360:512-19.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509211&pid=S0212-1611200700060001400002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">3. Schrezenmeir J, De Vrese M. Probiotics, prebiotics and symbiotics: approaching a definition. Am J Clin Nutr 2001; 73 (2 Supl.):421S-429S.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509212&pid=S0212-1611200700060001400003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">4. Marteau P, Seksik P, Jian R. Probiotic and intestinal health effects: a clinical perspective. Br J Nutr 2002: 88(Supl. 1):S51-57.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509213&pid=S0212-1611200700060001400004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">5. Saavedra JM, Bauman NA, Oung I y cols. Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention of diarrhea and shedding of rotavirus. Lancet 1994; 344:1046-1049.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509214&pid=S0212-1611200700060001400005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">6. Szajewska H, Kotowska M, Mruckovicz JZ y cols. Efficacy of Lactobacillus GG in prevention of nosocomial diarrea in infants. J Pediatr 2001; 138:361-365.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509215&pid=S0212-1611200700060001400006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">7. Kruis W, Schutz E, Fric P y cols. Double-blind comparison of an oral Escherichia coli preparation and mesalazine in maintaining remission of ulcerative colitis. Aliment Pharmacol Ther 1997; 11:853-858.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509216&pid=S0212-1611200700060001400007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">8. Schiffrin EJ, Rochar F, Link-Amster H y cols. Immunomodulation of human blood cells following the ingestion of lactic acid bacteria. J Dairy Sci 1995; 78:491-497.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509217&pid=S0212-1611200700060001400008&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">9. Link-Hamster H, Rochat F, Saudan KY y cols. Modulation of a specific humoral immune response and changes in intestinal flora mediated through fermented milk intake. FEMS Immunol Med Microbiol 1994; 10:55-64.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509218&pid=S0212-1611200700060001400009&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">10. Mart&iacute;n R, Langa S, Reviriego C y cols. Human milk is a source of lactic acid bacteria for the infant gut. J Pediatr 2003; 143(6):754-758.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509219&pid=S0212-1611200700060001400010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">11. Olivares M, D&iacute;az-Ropero MP, G&oacute;mez N y cols. Oral administration of two probiotic strains, Lactobacillus coryniformis CECT5711 and Lactobacillus gasseri CECT5714, enhances the intestinal function of healthy adults. Int J Food Microbiol 2006; 107:104-111.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509220&pid=S0212-1611200700060001400011&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">12. Olivares M, D&iacute;az-Ropero MP, G&oacute;mez N y cols. The consumption of two probiotic strains, Lactobacillus coryniformis CECT5711 and Lactobacillus gasseri CECT5714, boost the immune system of healthy humans. Int Microbiol 2006; 9:47-52.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509221&pid=S0212-1611200700060001400012&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">13. Rodr&iacute;guez-Cabezas ME, G&aacute;lvez J, Lorente MD y cols. Dietary fiber down- regulates colonia tumor necrosis factor alpha and nitric oxide production in TNBS-induced colitic rats. J Nutr 2002; 132(11):3263-3271.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509222&pid=S0212-1611200700060001400013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">14. Xaus J, Comalada M, Valledor A y cols. Decorin inhibits macrophage colony-stimulating factor proliferation of macropahges and enhances cell survival through induction of p27 (Kip1) and p21 (Waf1). 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Prebiotics and resistance to gastrointestinal infections. Br J Nutr 2005; 93(Supl. 1): S31-34.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509230&pid=S0212-1611200700060001400021&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana">22. Saxelin M, Tynkkynen S, Mattila-Sandholm T, De Vos WM. Probiotic and other functional microbes: from markets to mechanisms. Curr Opin Biotechnol 2005; 16(2):204-211.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=3509231&pid=S0212-1611200700060001400022&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><p>&nbsp;</p>     ]]></body>
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