Perfil molecular del cáncer colorrectal sin afectación ganglionar de mal pronóstico mediante la determinación inmunohistoquímica de p53, ki67, VEGF y metaloproteinasa 9. ¿Es útil como modelo pronóstico de recidiva?
Molecular pattern of poor prognostic colorectal cancer without nodular involvement by immunohistochemical determination of p53, ki67, VEGF and metaloproteinase 9. It is useful as prognostic marker of recurrency?
Palabras clave: Cáncer colorrectal. Marcador pronóstico. p53. ki67. VEGF. MMP-9. Proceso metastásico.
Key words: Colorectal cancer. Prognostic marker. p53. ki67. VEGF. MMP-9. Metastatic process.
Sr. Director:
Aproximadamente un tercio de enfermos con cáncer colorrectal intervenidos quirúrgicamente con intención curativa, sin afectación ganglionar, fallecen debido a recidiva neoplásica local y/o a distancia. Deberíamos considerar la presencia de micrometástasis en estas neoplasias, infraestadiadas, que no se benefician de tratamiento adyuvante (1-3). Intentamos crear un perfil molecular mediante determinación inmunohistoquímica de p53, ki67, VEGF y MMP-9, que identifique carcinomas colorrectales sin afectación ganglionar de mayor agresividad, mal estadiados con métodos convencionales.
]]> Realizamos un estudio retrospectivo de 64 enfermos con cáncer colorrectal, intervenidos quirúrgicamente con carácter electivo, e intención curativa en nuestro servicio entre 1995 y 1999. Tras fijación en formol tamponado al 10% de las piezas resecadas los bloques de tejido se incluyeron de forma habitual en parafina. Se realizaron 6 secciones consecutivas de 4 mm de grosor de los bloques correspondientes los bordes neoplásicos. Las secciones fueron teñidas con hematoxilina-eosina y otras secciones desparafinadas teñidas con la técnica de inmunohistoquímica, tras desenmascaramiento antigénico con tampón citrato en microondas, utilizando el protocolo Dako EnVision+TM, en inmunoteñidor automático TechMate 500 (DakoCytomation). Se utilizó para p53, proteína anómala nuclear tras inactivación del gen supresor p53, anticuerpo monoclonal PAb240 (Dako Cytomation), 1:75. Para Ki-67, marcador de proliferación celular, se utilizó la clona MIB1 (Dako), 1:120. Para MMP-9, enzima proteolítica que permite la invasión local por las células tumorales, anticuerpo monoclonal 15W2 (NCL-MMP-9-439, Novocastra Laboratories, Reino Unido), 1:40. Para VEGF, glicoproteína capaz de estimular la neoformación vascular, anti-VEGF policlonal, BioGenex (San Ramón, EE.UU.), tanto concentrado (PU360-UP) 1:10, como prediluido (AR360-5R). La cuantificación del porcentaje de células positivas en microscopía óptica para cada marcador inmunohistoquímico se realizó por dos patólogos diferentes. Se incluyó porcentaje de células positivas (%), intensidad global de la tinción e Histoscore (HSCORE). Las secciones tisulares teñidas mediante técnicas inmunohistoquímicas se valoraron semicuantitativamente según el método descrito por McCarty y cols. (4). Las intensidades se clasificaron como cero (sin tinción), +1 (tinción débil), + 2 (tinción evidente) y + 3 (tinción muy fuerte), en relación con el control interno utilizado para cada conjunto de preparaciones procesadas en el mismo lote en inmunoteñidor automático (Fig. 1). Para cada preparación se determinó, de forma independiente, el valor denominado Hscore obtenido tras aplicar la fórmula: HSCORE = ∑ (I x PC), que representan intensidad y porcentaje de células teñidas con cada intensidad.
La edad media de la población estudiada, n = 64, fue de 68,65 ± 10,16, siendo el 40% varones. La localización fue rectal en 30 enfermos, 46,9%, y en colon derecho en 14 enfermos, 21,9%. La diferenciación neoplásica fue buena en el 54,7%. La estadificación según Astler y Coller fue: A, 2, 3,1%; B1, 18, 28,1%; B 2, 44, 68,8%. Existió componente mucinoso en 7 enfermos, 10,9%. Los valores de las variables estudiadas fueron: ki67, 21,98 ± 19,73; Hscore ki 67: 54,79 ± 61,74; p53: 12,03 ± 22,22; Hscore p 53: 26,40 ± 55,19; Vegf: 20,59 ± 21,53; Hscore vegf: 37,78 ± 49,57. MMP-9: 51,62 ± 26,91; Hscore MMP-9: 122,56 ± 87,96. El seguimiento mediano fue de 42 meses, 7-93. Existió recidiva en el 35,9%, y 26 enfermos fallecieron, 40,6%. Existió correlación entre p 53 and ki67, p = 0,048, rho: 0,248 y entre VEGF y MMP-9, p = 0,02, rho: 0,291, y p53 con VEGF, p = 0,025, rho: 0,281. No existió relación significativa entre los valores de las variables estudiadas y su Hscore, y la existencia de recidiva y/o mortalidad del enfermo tras aplicación del modelo de regresión de Cox, y del modelo de Kaplan Meier para valores dicotomizados utilizando el valor de la media como punto de corte.
La correlación existente entre VEGF y MMP-9, p53 y ki67, y p53 y VEGF, consolida la funcionalidad de estas variables en el proceso metastásico y por tanto la posibilidad de terapias inhibidoras como tratamiento adyuvante o definitivo. La determinación inmunohistoquímica de los marcadores estudiados, y por lo tanto sus valores, no podrían ser considerados como marcadores pronóstico en relación a recidiva y/o mortalidad del enfermo con cáncer colorrectal sin afectación ganglionar según nuestros resultados. Consideramos que la heterogenicidad del tejido neoplásico puede producir una gran variabilidad en la determinación inmunohistoquímica de los marcadores estudiados, y por lo tanto en los valores determinados, que no se identificarían con el comportamiento biológico de la neoplasia colorrectal estudiada, por lo que deberíamos hacer uso de ellos con cautela.
D. Padilla, T. Cubo, P. Villarejo, A. López, M. García1, R. de la Plaza,
A. Jara, P. Menéndez, D. Gambí, B. Menchen, R. Pardo y J. Martín
Servicio de Cirugía General y de Aparato Digestivo.
1Servicio de Anatomía Patológica. Hospital General. Ciudad Real
Bibliografía
1. Petersen VC, Baxter KJ, Love SB, Sherpherd NA. Identification of obcjetive pathological prognostic determinants and models of prognosis in Duke's B colon cancer. Gut 2002; 51: 65-9.
2. Williams GT. A long hard look at Duke's B. Gut 2002; 51: 6-7.
3. Stoeltzing O, Liu W, Reinmuth N, Parikh A, Ahmad SA, Jung YD, et al. Angiogenesis and antiangiogenic therapy of colon cancer liver metastasis. Ann Surg Oncol 2003; 10: 722-33.
4. McCarty KS, Szabo E, Flowers JL, Cox EB, Leight GS, Miller L, et al. Use of a monoclonal anti-estrogen receptor antibody in the inmunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res 1986; 46: 4244-8.
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